请帮忙分析细胞周期结果

iwtbbm

我的细胞周期结果，用mofit软件分析的，图片没有别人的漂亮，是不是拟合的不好？（图片导出为wmf格式，转换后，峰图变成黑色了）。请帮忙分析下。谢谢

niwanmao

建议：
1、下面两个设门左边这个稍往右移，把右侧细胞圈住。
2、有效细胞数量尽可能达到30000个以上。
3、拟合需要不断调节峰的位置和g2/g1比例。
4、由于这个是cr的，而且版本旧，所以只能输出黑白的。可通过虚拟打印为pdf实现高清输出。

iwtbbm

niwanmao 发表于 2013-5-7 05:44

                               
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建议：
1、下面两个设门左边这个稍往右移，把右侧细胞圈住。
2、有效细胞数量尽可能达到30000个以上。

谢谢详细的指导！
1、我没有样品定位g2/g1峰的位置，能否再具体说明如何调节峰的位置和g2/g1？
2、用70%乙醇固定时，出现板块，很难吹散。导致过滤时丢失，细胞量少。记得您有个帖子说，乙醇固定的操作很关键，请具体说一下操作事项
谢谢

niwanmao

iwtbbm 发表于 2013-5-15 11:16

                               
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谢谢详细的指导！
1、我没有样品定位g2/g1峰的位置，能否再具体说明如何调节峰的位置和g2/g1？
2、用70% ...

检测的时候，如果你不明确你要检测的细胞倍体性质，最好用鸡红细胞做单倍体对照，确定G1峰的倍体性质。分析的时候G2和G1峰的拟合位置建议先根据空白对照的细胞做，这样容易定下来，然后再分析药物处理的细胞。

至于乙醇固定，象你所说的这种情况，可能还是一个操作的问题。你可以将70％的乙醇放在振荡器上持续振荡，然后边振荡边往里面滴细胞，这样可以防止细胞粘连。

ddn111

样品处理应该有问题吧，细胞也太少了！
355个细胞，样本细胞量不够啊！
圈门就干脆不要左边那个了！

iwtbbm

ddn111 发表于 2013-5-16 10:28

                               
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样品处理应该有问题吧，细胞也太少了！
355个细胞，样本细胞量不够啊！
圈门就干脆不要左边那个了！ ...

谢谢！“圈门就干脆不要左边那个了！”是要所有细胞吗，那不是把碎片和粘连得都包括了吗？
（忘记说明了，我的材料是斑马鱼胚胎细胞，吹打获得悬浮细胞时，会产生很多碎片。）

iwtbbm

niwanmao 发表于 2013-5-15 11:56

                               
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检测的时候，如果你不明确你要检测的细胞倍体性质，最好用鸡红细胞做单倍体对照，确定G1峰的倍体性质。分 ...

谢谢指导！我试一下

niwanmao

iwtbbm 发表于 2013-5-16 10:56

                               
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谢谢！“圈门就干脆不要左边那个了！”是要所有细胞吗，那不是把碎片和粘连得都包括了吗？
（忘记说明了 ...

胚胎细胞？那属于实体组织了，你是怎么处理成单个悬浮细胞的？

iwtbbm

niwanmao 发表于 2013-5-16 11:21

                               
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胚胎细胞？那属于实体组织了，你是怎么处理成单个悬浮细胞的？

受精后6-10h的胚胎，应该属于实体组织，这个时候的胚胎为一团细胞，细胞间结合的不是很紧密，可以用柔和吹打的方法获得悬浮细胞!也会产生很多碎片。

niwanmao

iwtbbm 发表于 2013-5-22 09:21

                               
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受精后6-10h的胚胎，应该属于实体组织，这个时候的胚胎为一团细胞，细胞间结合的不是很紧密，可以用柔和吹 ...

斑马鱼胚胎细胞周期处理步骤见下方截图，这本书里面似乎用500ul DMEM加上10％FBS解离，并用滤网过滤处理成单个细胞悬液，@iwtbbm  是否可以参考一下？

斑马鱼胚胎细胞周期处理步骤

来源：The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology: Cellular and Developmental Biology http://books.google.com.hk/books?id=8vZU9ZYaYEEC&lpg=PA111&ots=elLmQiLoLC&hl=zh-CN&pg=PA112#v=onepage&q&f=false