关于检测PBMCs中NK细胞的抗体选择？

kobe327292007

RT，我现在用的是抗CD3的抗体是：
FITC anti-human CD3
Human peripheral blood lymphocytes
stained with HIT3a FITC
Catalog # / Size: 300305 / 25 tests
300306 / 100 tests
Clone: HIT3a
Isotype: Mouse IgG2a, k

抗CD56的抗体是：
PE anti-human CD56 (NCAM)
Human peripheral blood lymphocytes
stained with MEM-188 PE
Catalog # / Size: 304605 / 25 tests
304606 / 100 tests
Clone: MEM-188
Isotype: Mouse IgG2a, k

是Biolegend公司的产品。

我想知道的是，你们一般是选择哪家公司的哪个产品？克隆号重要么？

还有就是这个Cocktail的咋样啊？
Anti-human CD3 FITC/(CD16+CD56) PE Cocktail
Catalog # / Size: 319101 / 50 tests
Clone: UCHT1/3G8+MEM-188
Isotype: Mouse IgG1/IgG1/IgG2a
Reactivity: Human
Anti-human CD3 FITC(CD16 CD56) PE Cocktail.pdf (35.1 KB, 下载次数: 13)

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PE anti-human CD56 (NCAM) Antibody-2.pdf (51.46 KB, 下载次数: 1)

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niwanmao

kobe327292007 发表于 2013-5-7 13:39

                               
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还有两个问题想问一下：

一，为什么会出现不同的克隆号，具体是由什么区分的？

1、克隆号表明抗体来源的细胞株克隆，例如A公司用AA细胞株打出了CD3，那么他们会给他一个克隆号AAaa之类的，B公司用BB细胞株打出了CD3，他们给它一个克隆号BBbb之类的。这两个克隆出来的虽然都是CD3，但是可能因为采用的细胞株种类不同，或者提纯的工艺等等不同，导致其效价、染色结果等上会有所区别。所以克隆号才是决定抗体质量的根本性因素。现在国外的文章要求你在materials and methods中提供克隆号，而不是货号。

2、cocktail只是几种抗体混合而成，只是他们已经经过验证，证明搭配没有问题，荧光补偿当然是必须要做的喽

niwanmao

从克隆号看问题应该不大。建议选cocktail可能会更合算。

kobe327292007

niwanmao 发表于 2013-5-7 13:11

                               
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从克隆号看问题应该不大。建议选cocktail可能会更合算。

还有两个问题想问一下：

一，为什么会出现不同的克隆号，具体是由什么区分的？
二，选用cocktail，还是要用FITC-CD3和PE-CD56分别做荧光补偿是不是？

kobe327292007

niwanmao 发表于 2013-5-7 13:55

                               
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1、克隆号表明抗体来源的细胞株克隆，例如A公司用AA细胞株打出了CD3，那么他们会给他一个克隆号AAaa之类 ...

嗯，很清楚了。

老师你用过这个cocktail么？见别人用过这个么？不知道好不好用啊。

dragonhzqsmmu

kobe327292007 发表于 2013-5-7 14:00

                               
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嗯，很清楚了。

老师你用过这个cocktail么？见别人用过这个么？不知道好不好用啊。 ...

我也准备做，不过是单买的三个抗体，再加上一个CD16，试试看看

kobe327292007

dragonhzqsmmu 发表于 2013-6-13 17:23

                               
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我也准备做，不过是单买的三个抗体，再加上一个CD16，试试看看

你买了啥抗体啊？谁家的啊？多少钱啊？

dragonhzqsmmu

biolegend的，跟你一样

kobe327292007

dragonhzqsmmu 发表于 2013-6-13 18:09

                               
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biolegend的，跟你一样

给你看个结果，还不错哦

dragonhzqsmmu

我想用不同的荧光标记CD56和CD16，做做NK细胞的亚群看看，CD56用的是PE，CD16用的是APC，还没有试