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流式细胞术可定量单细胞的蛋白表达水平。由于PBMC中细胞组成复杂，因此流式细胞术是研究这些细胞群体功能和表型最好的研究工具。目前已有不少流式细胞术检测PBMC细胞群体的文章，在刚开始做PBMC研究时，可参考这些文章。
然而，直接用这些文章中的抗体组合可能并不一定适合您当前的实验或进一步研究。因此，大家需要理解如何设计最佳的流式细胞术方案。
流式细胞术使用荧光素结合的抗体结合到靶向分子，这些荧光素可被仪器检测到，现在的机器少的可以同时检测4色，多的可以检测10几甚至20几种标记。然而，由于目前现有的荧光素在激发和发射波长之间大多存在一定程度的重叠，因此并不是说你的机器可以检测10色，你就肯定可以设计出10种抗体的组合直接用于检测，实际上我们还需要在设计检测方案的时候考虑到各种荧光之间的渗漏，尽可能优化组合以使其补偿尽可能小。虽然现在的流式细胞术分析软件可以计算这些荧光渗漏并可离线调节补偿，但这并非是完美的解决方案。
由于荧光光谱的重叠，所以在我们在设计抗体方案组合时需要考虑以下几点：
首先，选择你希望在组合中使用的荧光素。为此，你需要了解你的流式细胞仪激光器及滤光片配置，这些配置可告诉你哪种激发波长和发射波长的荧光素更适合您的机器。
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发表于 2013-5-8 14:07:06
发表于 2013-5-9 02:10:14
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