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悬赏1流星已解决
准备用Dio和PI进行NK细胞杀伤功能的检测。
介绍一下DIO：
DiO即DiOC18(3)，全称为3,3′-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现绿色荧光。DiO是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。
DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiO被激发后可以发出绿色的荧光，DiO和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。其中，最大激发波长为484nm，最大发射波长为501nm。
我的想法呢是这样，用DIO染料先把K562细胞染色，然后将PBMC同标记的K562细胞进行混合，杀伤。
之后在混合物中加入PI，这样被杀伤的K562细胞会染上PI的颜色。
检测的时候，如图所示：
只有右上角2内的细胞为杀伤的细胞，左上角的应该为PBMC里面的一些死细胞，而右下角为活的K562细胞，这样将2的细胞总数/2+4细胞总数，即为杀伤率。
我想问的问题是：
1.此方法是否可行？
2.需要不需要用多聚甲醛固定？如果需要，在哪一步固定？
因为从来没有做过类似实验，希望有经验的朋友帮忙回复一下，谢谢。 |
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国内买的其实多数都是进口分装的，关键还是得找个有诚信的，避免产品被稀释。
其实你直接买sigma的粉剂嘛，这种造不了假的。
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发表于 2013-7-1 10:40:04
发表于 2013-7-1 10:40:05
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