求教小球的问题

aivy · 发表于 2013-10-12 10:14:22

所有样品都加入了10ul的小球，另外也单独做了一管只有小球的样品，但是很多只管子里小球都没有检测出来，单独加小球的管也没有检测出，有遇到过类似情况的么？

didi_zhou · 发表于 2013-10-12 11:25:30

什么小球？有没有荧光？电压和阈值有没有正确？
如果是荧光计数微球的话是不是强度太强了造成的？
是不是由于设门原因已经把小球给排除了？

gcz5340 · 发表于 2013-10-12 22:17:54

应该是电压的问题，一般微球比较小2-3um，可能没有找到群体。

aivy · 发表于 2013-10-15 09:19:27

didi_zhou 发表于 2013-10-12 11:25

登录/注册后可看大图

什么小球？有没有荧光？电压和阈值有没有正确？
如果是荧光计数微球的话是不是强度太强了造成的？
是不是由 ...

没有荧光的小球，在没有设门的情况下就不见了，但是有的样品里面又有，所有的参数条件都是一样的。

haven_t · 发表于 2013-10-15 09:35:12

aivy 发表于 2013-10-15 09:19

登录/注册后可看大图

没有荧光的小球，在没有设门的情况下就不见了，但是有的样品里面又有，所有的参数条件都是一样的。 ...

阈值呢？最好不要用FSC

chymanhz · 发表于 2013-10-15 10:55:02

他使用的是不带荧光的微球，必须使用FSC，你用什么仪器？需要调整FSC增益以及阈值，确保小球出现，建议单独小球的先调试出条件来，另外，浓度是多少，10ul有多少个小球了？配置前混匀了没有？

haven_t · 发表于 2013-10-15 15:31:05

没有荧光小球和碎片的区分有点困难哦。先用双指数坐标显示，避免小球落在坐标轴上，如果还找不到群体就只能增加小球浓度、减小阈值，调高FSC电压了。

sally_no10 · 发表于 2013-10-22 12:06:31

你可以圈上门,看看圈住轴可以没圈住轴的比例怎么样.如果是压轴了.会有很大差异.如果还找不到群体,看楼上几位老师的建议吧.

dragonhzqsmmu · 发表于 2013-10-23 18:56:31

请教各位老师，我想用1um微球（不带荧光标记）来设定microparticles的上界，用的是invitrogen的1umlatex微球，10ul重悬至1mlPBS上机后怎么看到三群？稀释一倍后位置不变，我想问一下1um的上界是像我左图的R5设置还是右图的R5设置？这三群是不是没有完全分散开的结果？我用的是vortex震荡，是不是超声一下分散的效果会好点？多谢

dragonhzqsmmu · 发表于 2013-10-23 18:58:46

另外，我的电压是否过低了，是否需要把电压调高，把这三群东西调到右上角，因为我检测的microparticles应该在这三群的左下位置

账号		自动登录	找回密码
密码			加入流式中文网

[其它] 求教小球的问题