PMG系列7：人外周血样本Phosflow操作流程

niwanmao

这里介绍的是Pharmingen第7个系列中文操作流程：人外周血样本BD Phosflow操作流程。该流程中包含了4个方法：Detergent method（方法1）、Mild or harsh alcohol method（方法2和3）、Harsh Detergent Method（方法4）。

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yuxuemeifeng

倪老师，若果只做细胞表面标记的染色，也需要破膜吗？

niwanmao

yuxuemeifeng 发表于 2014-12-31 10:20
倪老师，若果只做细胞表面标记的染色，也需要破膜吗？

细胞表面当然不需要破膜：）

yuxuemeifeng

谢谢，刚才又看到了表面染色的步骤。

babyface

倪老师，我们近期做全血中NK和T细胞中的某磷酸化指标，用的是Perm II,刺激时间设定为15min，每次用同样的刺激剂作用，得到的磷酸化水平很难稳定，每次测得的结果都不一样，而且阳性很弱。请问做磷酸化有哪些关键注意的点。

niwanmao

babyface 发表于 2017-6-20 16:48
倪老师，我们近期做全血中NK和T细胞中的某磷酸化指标，用的是Perm II,刺激时间设定为15min，每次用同样的刺 ...

需要排除两个问题：
一个是破膜剂效率问题，另一个是抗体问题。

babyface

niwanmao 发表于 2017-6-20 18:06
需要排除两个问题：
一个是破膜剂效率问题，另一个是抗体问题。

好的，谢谢倪老师。

snelgar

niwanmao 发表于 2017-6-20 18:06
需要排除两个问题：
一个是破膜剂效率问题，另一个是抗体问题。

倪老师好，我打算做病毒感染后p—stat3 stat5，试剂还没到，看到操作步骤都要用刺激剂，我看到的文献里结核感染后测同样指标没用到刺激剂，但表达水平很低，我估计我测的应该表达也比较低，请问是否需要刺激剂，表达量太低分群不明显是否对判断结果有很大影响，同时使用刺激剂量后能用刺激后表达情况来反应不同感染组间pstat3等的活化程度吗，还是只是看基础pstat3表达情况，谢谢

niwanmao

snelgar 发表于 2018-9-18 17:35
倪老师好，我打算做病毒感染后p—stat3 stat5，试剂还没到，看到操作步骤都要用刺激剂，我看到的文献里结 ...

如果是病毒感染样本，可以试着直接测。破膜可用甲醇。

snelgar

niwanmao 发表于 2018-9-18 17:52
如果是病毒感染样本，可以试着直接测。破膜可用甲醇。

谢谢老师