PMG系列9：小鼠脾细胞/胸腺细胞 Phosflow操作流程

niwanmao

这里介绍的是Pharmingen第9个系列中文操作流程：小鼠脾细胞/胸腺细胞BD Phosflow操作流程。该流程中包含了4个方法：Detergent method（方法1）、Mild or harsh alcohol method（方法2和3）、Harsh Detergent Method（方法4）。以下分8张图片显示。

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lipei2016

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babyface

磷酸化时间控制在1-30min，时间点是不是要严格控制，我们每一次做出的阳性磷酸化都水平不一样，而且阳性不明显，倪老师能帮忙解答一下吗？感觉磷酸化水平很不稳定。

niwanmao

babyface 发表于 2017-6-20 16:40
磷酸化时间控制在1-30min，时间点是不是要严格控制，我们每一次做出的阳性磷酸化都水平不一样，而且阳性不 ...

刺激的时间是需要固定，但是是根据你们的实验方案而固定的。
每次检测出来不一致，你可以考虑先从固定刺激时间开始着手摸索原因，然后再排除一下破膜、抗体等因素，如果是分群不明显造成的话，需要考虑抗体因素。

babyface

niwanmao 发表于 2017-6-20 18:04
刺激的时间是需要固定，但是是根据你们的实验方案而固定的。
每次检测出来不一致，你可以考虑先从固定刺 ...

好的，谢谢倪老师。

babyface

niwanmao 发表于 2017-6-20 18:04
刺激的时间是需要固定，但是是根据你们的实验方案而固定的。
每次检测出来不一致，你可以考虑先从固定刺 ...

好的，谢谢倪老师。

夏洛克

请问这三种方法怎么选择？ 想检测小鼠脾脏细胞里，STAT1/3/4/5的磷酸化水平，应该选择哪种方法？