流式细胞术检测活化caspase-3

niwanmao · 发表于 2014-1-13 20:08:13

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凋亡在各种生物行为和过程中起着关键性作用，从胚胎发育到淋巴细胞增殖、选择、平衡。细胞死亡的两个主要机制是内在途径和外在途径，两条途径最后汇集到caspase-3等效应酶的活化上。Caspase-3是一种天冬氨酸特异性的丝氨酸酶，是凋亡信号传导中明确的效应子，caspase-3前体（p32 caspase-3）是一种酶原，没有活性，一旦在保守的DEVD序列处蛋白水解，就变成活化的p17 caspase-3，从而导致细胞凋亡。

在这里，我们为大家提供两种简单并且重复性好的流式方法，可检测各种细胞中活化caspase-3的活性。

凋亡原理

直标法和间标法的结果对比

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dcl60066 · 发表于 2015-1-21 00:45:33

请问为什么a图药物处理的细胞直标和间标凋亡比例差别这么大呢，是间标的非特异染色引起的吗

niwanmao · 发表于 2015-1-21 09:02:17

dcl60066 发表于 2015-1-21 00:45
请问为什么a图药物处理的细胞直标和间标凋亡比例差别这么大呢，是间标的非特异染色引起的吗 ...

荧光标记不同，而且间标确实非特异性染色更多。

jieam2007 · 发表于 2015-10-21 00:06:39

正准备做这个因子，非常有用的东东，谢谢

灿烂猫 · 发表于 2018-7-25 08:53:55

学习了，谢谢倪老师

snelgar · 发表于 2018-9-13 13:00:04

@niwanmao 请问版主，caspase-3需要同型对照吗，好像没有同型对照卖，是不用吗?谢谢

niwanmao · 发表于 2018-9-13 13:19:07

snelgar 发表于 2018-9-13 13:00
@niwanmao 请问版主，caspase-3需要同型对照吗，好像没有同型对照卖，是不用吗?谢谢 ...

可以用正常对照和诱导凋亡的阳性对照，确定峰的位置。以顶楼帖文章中的图为例，主要是以阳性样本双峰之间的凹处为分界。

Veblen · 发表于 2019-7-13 18:06:55

niwanmao 发表于 2015-1-21 09:02
荧光标记不同，而且间标确实非特异性染色更多。

Caspase-3是位于胞浆内吧，那染色需要破膜，有需要注意的地方吗

niwanmao · 发表于 2019-7-14 21:50:29

Veblen 发表于 2019-7-13 18:06
Caspase-3是位于胞浆内吧，那染色需要破膜，有需要注意的地方吗

顶楼这份PDF里面写得很详细了啊，你没看吗？

Veblen · 发表于 2019-7-15 00:03:02

niwanmao 发表于 2019-7-14 21:50
顶楼这份PDF里面写得很详细了啊，你没看吗？

好的，只看了帖子，没有下载pdf

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