流式细胞术定量检测中性粒细胞吞噬功能

niwanmao

中性粒细胞有着不可思议的功能，可清除入侵体内的细菌、真菌等。这种作用主要是通过胞吞（即将目标内吞形成吞噬体，最后降解）实现的。因此，理解中性粒细胞如何与各种病原体相互作用，对不同刺激信号如何反应，均非常重要。本文是Methods Mol Biol. 2014的一个章节，介绍了通过流式细胞术检测中性粒细胞吞噬细菌功能的背景、具体方法步骤。
简言之，首先将细菌标记上荧光，在中性粒细胞吞噬之后，继续进行后续的标记，以区分粒细胞和残留在细胞外的细菌。
为了评估吞噬作用强弱，首先要确定一个中性粒细胞吞噬细菌的平均时间，然后用不同的细菌-中性粒细胞比例检测其功能。


由于流式细胞术很容易进行大批量、定量检测，故本方法可敏感、定量、快速地检测中性粒细胞吞噬功能，可重复性好。

实验流程：

实验流程

实验结果分析示例：

实验结果分析示例

全文下载：http://link.springer.com/protocol/10.1007%2F978-1-62703-845-4_18，亦或在此在线阅读
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dragonhzqsmmu

上一篇类似的文章，LZ贴的原文我再找找

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2014-2-10 17:22
上一篇类似的文章，LZ贴的原文我再找找

感谢贺兄的分享。您的这篇是利用台盼蓝与内吞白念菌、粘附白念菌结合后呈现的颜色不同而鉴别PMN内吞效率的，这个方法还真是没看到过，不错不错。
我看到这篇链接在上面，你有权限吗？

dragonhzqsmmu

总算找到了

之前我贴的那篇文章，我仔细看了一下，好像是利用非穿膜染料诸如台盼蓝或者EB淬灭掉未被吞噬细菌表面标记的绿色荧光，转而变成红色，从而与被吞噬进细胞内保持绿色的荧光区别，这个方法我还是头一次看到，不知道有没有高手做过？

流星杏子

楼上说的这种方法我也在这篇文献里看到过，用的是台盼蓝，supplemental information里面有详细的方法说明。
但是我之前做这个实验还遇到另一个问题，我是用4度共孵育来作为control，按道理说中性粒细胞在4度条件下只发生细菌的粘附而没有吞噬行为。但是结果4度control组的阳性率也相当高，例如实验组阳性率60%时，control大约能达到40~50%，我想知道这样的情况正常么？我们用的细菌是一种内源表达GFP蛋白的菌株，所以没办法用台盼蓝去淬灭。

niwanmao

流星杏子 发表于 2014-3-4 10:18
楼上说的这种方法我也在这篇文献里看到过，用的是台盼蓝，supplemental information里面有详细的方法说明。 ...

那么可以考虑用这里提到的第一种方法

pyhua

流星杏子 发表于 2014-3-4 10:18
楼上说的这种方法我也在这篇文献里看到过，用的是台盼蓝，supplemental information里面有详细的方法说明。 ...

您好，我想请教一下，标记大肠杆菌颗粒，文章中用的是Zymosan A and pHrodo，我想问问，只用其中一种可以吗?

niwanmao

pyhua 发表于 2016-7-15 09:48
您好，我想请教一下，标记大肠杆菌颗粒，文章中用的是Zymosan A and pHrodo，我想问问，只用其中一种可以 ...

我没做过，搜了下，理论上一种够了吧

zzp

受教了,谢谢！

chevalierx

关于吞噬实验，我试过转入GFP的E. Coli，标记FITC的latex beads和dextran，感觉latex beads效果最好，因为本身不带刺激性。使用细菌的话很难排除经由TLR通路活化而引起的吞噬功能。