抗体孵育

lin850424

遇到一个很奇怪的问题，我要加四种抗体，fitc，APC，pe，7-aad，结果冰上孵育30min后，竟然有一种（fitc）在各个流式管中都没染上，我以为自己没加上造成的结果（后来回忆了一下，我记得肯定是加了的），又重新加了一遍，结果可以显色了，但第二天，我找人监督我加抗体，所以抗体肯定加上了，竟然又有一种没染上，这次是APC，又重新加，结果正常。之前已经做了很多次，步骤一样，没遇到过这种情况啊。各位帮忙分析一下原因吧，我实在想不出来为什么啊。

niwanmao

你后来重新加上就正常说明前面应该是没有加。你把前后的对比图放上来看看

lin850424

肯定是加上了，我分组有十几组，不可能每一个都忘了加吧，而且，第二次我让旁边的人看着我加的，就是保证我没加错，图我覆盖了，没染上的没保存。

lin850424

抗体加之前混匀力度不够可能出现这种情况吗？

niwanmao

lin850424 发表于 2014-3-16 09:21
抗体加之前混匀力度不够可能出现这种情况吗？

如果图被覆盖了就没法追溯了。

如果是抗体没加，从图上可以看的出那个通道很干净；如果是抗体量加少了或者没处理好，那么那个通道还是会有信号的，或者荧光还是会有点上去的。

shujiez

赞 ls 果真经验丰富!

珊珊

个人认为是抗体加的量比较少有可能是没有吸到，所以你认为是加了其实没加进去。提前配好抗体混合物，加之前离心可以避免。

lin850424

珊珊 发表于 2014-3-21 21:26
个人认为是抗体加的量比较少有可能是没有吸到，所以你认为是加了其实没加进去。提前配好抗体混合物，加之前 ...

这个可能性太小了，如果一两组没加进去有可能，我加的是8ul，10几个组呢，不能每一个都没加进去啊，这个您说的也不是没可能吧，我下次注意，不过抗体混合物是什么意思？怎么配的

niwanmao

lin850424 发表于 2014-3-22 09:01
这个可能性太小了，如果一两组没加进去有可能，我加的是8ul，10几个组呢，不能每一个都没加进去啊，这个 ...

抗体cocktail指的是如果你要加A、B、C三个抗体，每个抗体都是加8ul，要做10个标本，那么就先制作A、B、C的mix：
A－－80ul
B－－80ul
C－－80ul

混匀后平均分配到10根管子中（每管24ul），这样就可以避免漏加某一个抗体（注：为了防止平均分配时由于加样误差导致分配不够，可以在总量中稍微多加一点，例如A、B、C均加到82ul）。

lin850424

niwanmao 发表于 2014-3-22 09:33
抗体cocktail指的是如果你要加A、B、C三个抗体，每个抗体都是加8ul，要做10个标本，那么就先制作A、B、C ...

哦，哦，好的，谢谢倪老师，那姗姗写的加之前还离心是为什么啊？