JC-1检测凋亡细胞

niwanmao

JC-1 (5, 5´, 6, 6´-tetrachloro-1, 1´, 3, 3´-tetraethylbenzimidazol-carbocyanine iodide)是一种亲脂性荧光阳离子染料，可掺入线粒体膜，由于线粒体生理性膜电位的存在，形成聚集体。聚集后，JC-1的荧光性质就发生了改变，从绿光转换为橙光。完整的活细胞JC-1染色后，可显示线粒体显著的橙光，可被流式细胞仪FL2通道检测到，而凋亡细胞由于线粒体膜电位的降低，从而使得橙色荧光降低，而绿色荧光略增高。通过这种荧光变化，就可以使凋亡细胞和非凋亡细胞区分开来。
对于自配试剂的，JC-1一般用DMSO配成1000x储存液(5 mg/ml)。
如果是标记贴壁细胞，需先将JC-1储存液用培养基稀释至5 µg/ml的工作液（稀释时注意边稀释边振荡，以防止沉淀形成），然后再将加了JC-1的培养基加到贴壁细胞中，37℃孵育10分钟或室温15分钟，最后用PBS洗涤两次、胰蛋白酶消化，500 µl PBS重悬，上机分析。
如果是悬浮细胞，可将悬浮细胞与用培养基稀释至10 µg/ml 的JC-1溶液以1：1混合，最终浓度5 µg/ml，同样37℃孵育10分钟或室温15分钟，最后用PBS洗涤两次，500 µl PBS重悬，上机分析。

FL1和FL2大致的补偿如下：
FL1-7% FL2
FL2-74% FL1

示例结果：

niwanmao

风车 发表于 2015-2-2 11:19
倪老师回复这么及时~太谢谢了。那比例要求呢？98%~99%？

参照本帖的附图即可，JC－1设门要求没象别的分析那么严格，关键还是看变化趋势。

niwanmao

HGYFGCTDTDTF 发表于 2014-11-14 15:39
倪老师，请问流式检测线粒体膜电位（JC-1）的结果中，双染区域如何分析呢？ ...

顶帖的图片已经更新，更清楚地告诉你如何分析双染细胞群了。
左侧是未补偿的，右侧是调节好补偿的。

苏格兰白草莓

倪老师，我们正在做JC-1的实验，数据也很明显能够看到橙光细胞群因药物由强变弱由多变少，且绿光细胞群逐渐增多增强，但是分析的数据不尽人意，明明光看图都看得到变化，但是如果按照文献上那个绿光/橙光比值就不怎么有明显变化了，很奇怪的是有些文献比值相差好几倍，有些又只有几分之几，还有就是那个比值很多文献也没明确说明到底是什么的比值，是阳性百分比还是平均荧光强度，如果是荧光强度，那么到底是整个通道的荧光强度平均值相比，还是说只是阳性门内的荧光强度的均值，希望能够在数据处理上能够有人提点一下，谢谢了先！！！

huikaimin

学习了。谢谢分享

niwanmao

苏格兰白草莓 发表于 2014-07-13 22:44:18

                               
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倪老师，我们正在做JC-1的实验，数据也很明显能够看到橙光细胞群因药物由强变弱由多变少，且绿光细胞群逐渐

如果出现明显的分群，我建议你分析百分比。如果分群不明显，可以采用FL2的荧光比值。

HGYFGCTDTDTF

倪老师，请问流式检测线粒体膜电位（JC-1）的结果中，双染区域如何分析呢？

HGYFGCTDTDTF

好的，谢谢您倪老师！

zylucky98

谢谢倪老师的分享！

风车

倪老师您好，我刚开始做jc-1，流式分析，请问十字象限线如何确定？及各象限的含义是什么？先谢谢了！

niwanmao

风车 发表于 2015-2-2 10:05
倪老师您好，我刚开始做jc-1，流式分析，请问十字象限线如何确定？及各象限的含义是什么？先谢谢了！ ...

结合阳性对照和阴性对照进行设门。