全血做免疫表型，怎么在染之前还要Wash

zark_00 · 发表于 2014-7-9 13:58:14

看到一篇文献，上面做猴全血免疫表型，全血加到管中后，居然又加了Staining buffer，混匀后离心，然后才弃上清。然后才加抗体，依次往下走。

常规做法不是不需要先洗么。

请问各位，这样做法是合理的么，是什么目的？谢谢

niwanmao · 发表于 2014-7-9 17:50:30

检测什么指标？

zark_00 · 发表于 2014-7-9 21:25:54

CD45 CD3 CD4 CD8 CD20 CD16

niwanmao · 发表于 2014-7-9 21:54:49

zark_00 发表于 2014-7-9 21:25
CD45 CD3 CD4 CD8 CD20 CD16

一般不洗影响不大，但由于这里要检测CD16，所以如果用Fc受体阻断或者先用含血清的Staining buffer洗涤几次，可以减少CD16假阴性的可能。

zark_00 · 发表于 2014-7-9 22:06:38

niwanmao 发表于 2014-7-9 21:54
一般不洗影响不大，但由于这里要检测CD16，所以如果用Fc受体阻断或者先用含血清的Staining buffer洗涤几 ...

谢谢回复，那就是二选一的问题，如果做大鼠的，都推荐加抗体前加阻断剂阻断，那就不需要含血清的Staining buffer洗了吧

niwanmao · 发表于 2014-7-9 22:16:02

zark_00 发表于 2014-7-9 22:06
谢谢回复，那就是二选一的问题，如果做大鼠的，都推荐加抗体前加阻断剂阻断，那就不需要含血清的Staining ...

是的。

zark_00 · 发表于 2014-7-10 10:49:18

还有个问题，还是做免疫表型，还是上面的指标，加荧光抗体孵育时，有的是4度孵育，有的是常温孵育。这样做的原因是什么，如果是大鼠的话，一般是常温还是4度孵育。谢谢

dragonhzqsmmu · 发表于 2014-7-10 20:42:55

zark_00 发表于 2014-7-10 10:49
还有个问题，还是做免疫表型，还是上面的指标，加荧光抗体孵育时，有的是4度孵育，有的是常温孵育。这样做 ...

基本上好像国外的protocol都是4度，减少非特异性染色？常温可以加快染色过程，缩短时间？

niwanmao · 发表于 2014-7-10 20:50:43

zark_00 发表于 2014-7-10 10:49
还有个问题，还是做免疫表型，还是上面的指标，加荧光抗体孵育时，有的是4度孵育，有的是常温孵育。这样做 ...

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