补偿问题（超强阳性怎么办？）

續、寫。

今天帮同门调补偿，但是遇到了问题，一个药物自带红色荧（我选PI通道；PS：机子是BD FACSCanto II），这个药物能进入细胞造成100%阳性，然而另一个通道（FITC）也是基本100%，调出补偿计算后，两个通道之间的影响很大（扣除值都有50%-60%），最后尝试跑了一下单染，发现会相互影响（出现假阳性），请求高手帮解决问题。{:soso_e130:}倪老师在吗？坐等

niwanmao

自发荧光有时候确实调不好补偿，可以把要求放宽点，就是允许它稍微向上翘。具体的补偿值或者原始数据文件能否给我们看看？

續、寫。

niwanmao 发表于 2014-10-4 08:35
自发荧光有时候确实调不好补偿，可以把要求放宽点，就是允许它稍微向上翘。具体的补偿值或者原始数据文件能 ...

倪老师，因为之前又调了一遍，发现补偿可以用了，但是这次又有新的细胞，又要调补偿，可是这次我又调不出来了，，倪老师有空能帮看看不？数据我上传一下。

niwanmao

續、寫。 发表于 2015-1-13 09:04
倪老师，因为之前又调了一遍，发现补偿可以用了，但是这次又有新的细胞，又要调补偿，可是这次我又调不出 ...

等你的数据：）。

續、寫。

这是调补偿的数据，blank，FITC（Annex V），PI（药物颜色）。

續、寫。

我还有一些其他数据，不如之前成功调解补偿的数据

niwanmao

續、寫。 发表于 2015-1-13 09:10
这是调补偿的数据，blank，FITC（Annex V），PI（药物颜色）。

看上面我对AV单染标本设的两个门，就会发现死细胞和碎片存在很强的非特异性染色，所以这些对角线的非特异性染色都是死细胞和碎片造成的，因此造成软件自动补偿过大。
从图中还可以看出，你并没有用AV阳性对照来设置，这是不对的。如果你要调FL2-FL1，那么你需要选择肯定能够表达Annexin V的标本，用某种明确诱导凋亡的因素（例如双氧水等）诱导该种细胞凋亡等

續、寫。

niwanmao 发表于 2015-1-13 09:52
看上面我对AV单染标本设的两个门，就会发现死细胞和碎片存在很强的非特异性染色，所以这些对角线的非 ...

倪老师的意思是，我的Annex V阳性做的不理想，从而导致的的补偿调解失败吗？ 我用的是BD FACSCanto II 的自动调补偿模式，画门时我并没有把右下角的死细胞画进去。

niwanmao

續、寫。 发表于 2015-1-13 10:17
倪老师的意思是，我的Annex V阳性做的不理想，从而导致的的补偿调解失败吗？ 我用的是BD FACSCanto II 的 ...

不画进去也一样，annexin v你没有阳性，如何让软件自动帮你调节补偿？就算换了人也没法调啊，你说是吧。

續、寫。

只是我习惯用稍微对角细胞，感觉Annex V 的表达会高很多