细胞周期分析疑问

tq-liu

各位老师好！刚刚接触细胞周期检测，有很多不懂地方。1）附图是我做的一个数据，不知道细胞圈得对不对？我的G1峰和G2峰离得很近，我看论坛里比较好看的图S期都是细长型的，这个图是否可用？
2）CV%值（<8%）和RCS值(<3)，分析的时候是两个都必须小，还是更看重RCS值？我的数据都是CV%值在10左右，而RCS值都是<3，这样的数据是否可以接受；
3）我做的数据里，linearity，G2/G1的值都是1.8左右。造成这个值比2小这么多的原因主要是什么？是电压调试的时候，没调好？

4）FL2-A，FL2-W的图中，细胞有两个比较明显的绿色区域，不知道怎么解释，另外，右上角的细胞怎么是分散状态，和别人图粘连细胞呈现出的不一样。
还请各位老师不吝赐教！

niwanmao

1、该图可用。
2、相对来说，更看重RCS值，尽管CV值有点大，但还是可以用。
3、G2/G1的比例1.5～2.5都可以，<2是因为电压没有调好。但可以用。
4、FL2-A/FL2-W散点图上的形态分布与别人的不同，可能跟细胞性质不同、处理方法等有关。建议如下图红色线条圈门更好：

tq-liu

老师您好!非常感谢您的回答。在我的FL2-A，FL2-W的图中，是不是右上角那些蓝色的细胞就是粘连细胞？我做的是正常成人表皮角质细胞，在做流式的时候，细胞沉得特别快，不知道有没有和我一样的情况。

niwanmao

tq-liu 发表于 2014-10-24 10:57
老师您好!非常感谢您的回答。在我的FL2-A，FL2-W的图中，是不是右上角那些蓝色的细胞就是粘连细胞？我做的 ...

上面那幅图中红圈对应的对角线，其右侧就是粘连体。

tq-liu

老师您好！我按照您说的圈法，结果RCS值变大了，好奇怪。实在是不知道该怎么弄了，我把我原始数据传几个上来，麻烦老师帮我分析一下，我参考一下。麻烦您了！

tq-liu

如果空白样的图都设定好了的话，是不是药物的图就必须按照空白设定的来分析才能有可比性？？比如：空白样设定的G2/G1的比值为1.83，那后面药物的图都必须是1.83吗？

niwanmao

tq-liu 发表于 2014-10-27 22:08
老师您好！我按照您说的圈法，结果RCS值变大了，好奇怪。实在是不知道该怎么弄了，我把我原始数据传几个上 ...

如果不分析凋亡（你这几个文件应该都没有凋亡峰），那就可以直接用菜单中的sync wizard，可以更方便的调整G1和G2的位置，拟合结果还不错的啊。

tq-liu

老师，用sync wizard方法拟合出来的结果果真不错。但是，还是有个问题，就是Fit Diagnostics分析结果中cell#和average cell#两项值是红色的（附件图中黑色圈出部分），这是说明我圈的细胞数不够10000个吗？但是Modeled Events：15965（附件图中黑色圈出部分）；这个不是代表分析的细胞数量吗？求解！另外这两项对结果影响大吗？
非常感谢您的耐心解答！谢谢！

niwanmao

tq-liu 发表于 2014-10-28 15:34
老师，用sync wizard方法拟合出来的结果果真不错。但是，还是有个问题，就是Fit Diagnostics分析结果中cell ...

那个diagnositcs诊断的manual fit中的拟合结果，所以细胞数这和CV不适合sync wizard拟合的结果。

如果你比较看重这个，可以将sync wizard拟合的参数填到manual fit中，然后再拟合。

磊子-梦醒十分

niwanmao 发表于 2014-10-24 08:51
1、该图可用。
2、相对来说，更看重RCS值，尽管CV值有点大，但还是可以用。
3、G2/G1的比例1.5～2.5都可以 ...

倪老师，如果要分析凋亡的话这样红线条圈门也行嘛？