一个胞内蛋白的表达可是结果很不稳定

潜才lxl

各位前辈好，我做一个胞内蛋白的表达，同一个细胞株实验结果相差好大，有两次90%做题怎么只有10%，是不是流式结果很不稳定？
还有我用的是fitc染色，会不会因为pbs洗完后放置时间过长？因为本来约好的时间，一个老师突然插队，而且还做了1个小时，然后我才能上机，是因为放的时间长了吗？会对实验结果有什么影响呢？新人很多不懂，请大家多指教，谢谢大家啦，

niwanmao

上机前时间放置过长是会影响结果的。
另外，胞内染色的条件也会影响，有些破膜剂效果欠佳，导致你最后染出来的可能是一种弱表达，此时marker放的位置轻微变化就会导致数据极大的变化。

潜才lxl

niwanmao 发表于 2015-1-7 08:37
上机前时间放置过长是会影响结果的。
另外，胞内染色的条件也会影响，有些破膜剂效果欠佳，导致你最后染出 ...

谢谢管理员老师啦，放得时间过长是不是就荧光淬灭了呢，或者细胞死亡成团，导致实验结果偏低？还有marker位置是什么意思呢？我们只负责加样，由专门的老师负责上机的，我要怎样做才能保证数据的稳定可靠呢？放得时间过长的是不是那组数据就不能用了，还请前辈多多指教

niwanmao

潜才lxl 发表于 2015-1-7 21:42
谢谢管理员老师啦，放得时间过长是不是就荧光淬灭了呢，或者细胞死亡成团，导致实验结果偏低？还有marker ...

放置时间过长，你提到的情况都会发生。
至于marker位置的问题，你可以拍张分析结果的图片，就可以看出来了

潜才lxl

niwanmao 发表于 2015-1-7 21:51
放置时间过长，你提到的情况都会发生。
至于marker位置的问题，你可以拍张分析结果的图片，就可以看出来 ...

哦哦，谢谢老师解答，数据还没拷回来所以还不能上传分析图片，那一般洗后多长时间上机合适呢？我做FITC的，要是不能及时上机我该怎么办呢？怎么保证实验数据的可靠和稳定呢

niwanmao

潜才lxl 发表于 2015-1-7 22:26
哦哦，谢谢老师解答，数据还没拷回来所以还不能上传分析图片，那一般洗后多长时间上机合适呢？我做FITC的 ...

30分钟内上机比较合适。如果不能及时上机，用1％多聚甲醛固定，可能对细胞有稳定作用，但也得看指标不同而定，不是全部都适合。

潜才lxl

niwanmao 发表于 2015-1-8 08:41
30分钟内上机比较合适。如果不能及时上机，用1％多聚甲醛固定，可能对细胞有稳定作用，但也得看指标不同 ...

老师，你好，我做表达的数据结果三次求出的标准差有9多，这个标准差算大吗？发文章的时候能用吗？

niwanmao

潜才lxl 发表于 2015-2-9 18:15
老师，你好，我做表达的数据结果三次求出的标准差有9多，这个标准差算大吗？发文章的时候能用吗？ ...

没理解，9％还是9？你把结果用数字＋标准差表示出来看看

潜才lxl

niwanmao 发表于 2015-2-9 20:12
没理解，9％还是9？你把结果用数字＋标准差表示出来看看

64.7土9,46

niwanmao

潜才lxl 发表于 2015-2-9 20:50
64.7土9,46

表达率是吧？那应该还行吧。