AnnexinV中凋亡晚期的染料只有PI么？有没有其他的可以代替？

黄鱼 · 发表于 2015-3-14 16:37:07

AnnexinV中凋亡晚期的染料只有PI么？有没有其他的可以代替？最好是不要发红色荧光的？因为我们的药物是红色的，用了PI后，药物颜色对PI荧光影响很大，请问，有什么好方法呀？？？？？流式千百回了，哎.....

niwanmao · 发表于 2015-3-14 17:46:52

可以用7-AAD，在650 nm检测，与fitc、PE通道补偿小。

黄鱼 · 发表于 2015-3-15 11:01:40

我们发现细胞凋亡时用PI染料和药物表阿霉素作用于细胞，都可以染细胞核DNA使之产生红色，无法用control组做对照，不知道怎样解决，如何把两者分开的呀？您说的用7-ADD是单染么？

黄鱼 · 发表于 2015-3-15 11:09:06

niwanmao 发表于 2015-3-14 17:46
可以用7-AAD，在650 nm检测，与fitc、PE通道补偿小。

我们发现细胞凋亡时用PI染料和药物表阿霉素作用于细胞，都可以染细胞核DNA使之产生红色，无法用control组做对照，不知道怎样解决，如何把两者分开的呀？可是7-ADD在546nm下，发647的红色荧光，和PI的615的红色荧光和表阿霉素的620左右的红色页眉办法分开的样子呀？

niwanmao · 发表于 2015-3-15 11:30:15

黄鱼发表于 2015-3-15 11:09
我们发现细胞凋亡时用PI染料和药物表阿霉素作用于细胞，都可以染细胞核DNA使之产生红色，无法用control组 ...

一般问题不大。
实在担心，就用DAPI或Hoechst系列染料吧：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3992-1-1.html

macxuao · 发表于 2015-3-16 23:39:20

做过预实验表阿霉素荧光补偿调不过来。

niwanmao · 发表于 2015-3-17 08:34:10

macxuao 发表于 2015-3-16 23:39
做过预实验表阿霉素荧光补偿调不过来。

那就用紫外激光的核酸染料，dapi或hoechst系列。

FCS · 发表于 2015-3-17 15:36:17

如果没有紫外激光，改用BRDU-FITC，或caspase3-FITC如何？

susu · 发表于 2015-3-21 22:51:13

现在有很多染料可以代替PI来区分死活细胞。我们实验室采取方案是，细胞带绿光，就用APC的AnnexinV和Pi搭，有阿霉素的通常会在二三通道都有光，所以我们不选7AAd，而是用AnnexinV—Fitc和eflour660活细胞染料（在第四通道的，ebioscience公司的，BD公司也有这种染料，名称叫法不同）搭配。

susu · 发表于 2015-3-21 22:58:08

我们机器配有紫色激光，405的，所以，在遇到学生转染绿光阳性细胞加阿霉素后，等于一二三通道都会有光，这时就要用紫光激发的V450活细胞染料代替PI，Bd公司的，详细的可以找销售咨询

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