EGFP阴性细胞都死了

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上图FLI-H是EGFP（慢病毒转染后自带荧光），用的是annexin v-apc和7-AAD试剂盒，死细胞很多，但奇怪的是死细胞都是EGFP阴性的，怎么解释啊？难道是细胞死后EGFP荧光淬灭了，但是做免疫荧光的时候固定后也没有淬灭啊。@niwanmao

niwanmao

病毒转染效率达不到100％的啊，可能你的标本中死细胞集中在EGFP阴性吧，是不是你的培养体系中出了什么问题？
EGFP阴性细胞中7-AAD阴性的也有，只是比例比较少。

小憨

还没来得及表达GFP就死了呗~

小憨

小憨 发表于 2015-4-18 10:07
还没来得及表达GFP就死了呗~

或者就根本没转上

粼泐粼

niwanmao 发表于 2015-4-17 20:28
病毒转染效率达不到100％的啊，可能你的标本中死细胞集中在EGFP阴性吧，是不是你的培养体系中出了什么问题 ...

老师，他这个会不会因为死亡（破膜打孔等）导致GFP蛋白溶出还是其他什么原因，最后导致细胞没有了荧光信号呀？我最近做ADCC，用GFP标记的肿瘤靶细胞，效应细胞为PBMC，共敷4h，实验组发现GFP的靶细胞变少了，多了一群FITC弱信号的细胞

niwanmao

粼泐粼 发表于 2024-7-4 12:18
老师，他这个会不会因为死亡（破膜打孔等）导致GFP蛋白溶出还是其他什么原因，最后导致细胞没有了荧光信 ...

死亡是会丢失的
GFP跟FITC同一通道，为什么说『实验组发现GFP的靶细胞变少了，多了一群FITC弱信号的细胞』呢？