关于对照的问题

v2002lichao

最近做流式被关于对照的问题困扰，看了不少论坛里的帖子。一批样品测定T细胞分型（Th1 Th17 Treg），结合组内讨论我们准备做1.全染管 2. 刺激不染色管 3.刺激加胞内指标同型抗体管 4不刺激加胞内指标同型抗体管 5.不刺激全染管。
问问各位老师，这五管都需要做吗？还缺少其他的吗？ 不准备做FMO对照了。

niwanmao

你准备用什么方案？不建议这么设置。因为你检测的都是刺激过的标本，设置未刺激的管没有必要，而且未刺激的标本与刺激过的标本背景荧光水平不同。

建议全部用刺激的标本，对检测通道设置一个FMO。

v2002lichao

niwanmao 发表于 2015-5-24 16:36
你准备用什么方案？不建议这么设置。因为你检测的都是刺激过的标本，设置未刺激的管没有必要，而且未刺激的 ...

感谢倪老师的回答，我准备就做刺激之后的：1.刺激全染 2.刺激全不染 3.刺激加胞内指标的同型对照管。不过我用的BD的Foxp3抗体，说明书上没有推荐的isotype货号 我是不是就可以不做了？其他的如IL-17 IFN 都有推荐。

niwanmao

v2002lichao 发表于 2015-5-24 21:10
感谢倪老师的回答，我准备就做刺激之后的：1.刺激全染 2.刺激全不染 3.刺激加胞内指标的同型对照管。不过 ...

如果没有明确的isotype指定，那么可以空着，那就是FMO。