小鼠脾脏Treg检测

cathielinyu

各位老师：
本人最近刚开始做关于小鼠脾脏Treg的检测，遇到一些困难，希望能得到帮助。
选择的抗体：CD4-FITC, CD25-PE, FOXP3-PC5，检测的机器是贝克曼的FC500
1. 因为是脾脏，应该都是淋巴细胞细胞，FSS/SS圈门时把所有的细胞都圈进行吗？
2. 空白管调电压的时候，四通道总是出现两群分群明显的阴性峰，而一、二通道是只有一个阴性峰的，是什么原因？因为4通道一直有两群阴性峰，导致后面调补偿不知道应该怎么调了
3. 单标管调补偿时4通道的PC5是可以用其他的带PC5荧光的表面标记抗体调，比如说CD3-PC5，还是必须得用胞内标记foxp3-PC5单标调补偿？
非常感谢！

niwanmao

1、脾脏组织处理后，还会有较多实体组织细胞，所以不能全部圈。
2、建议你把原始数据或者图片结果传上来看看。
3、必须用foxP3 PC5调节，PE和PC5之间补偿不是很大，而且foxP3的荧光不会很强，所以不调问题也不大。

路人丙

niwanmao 发表于 2015-6-13 14:59
1、脾脏组织处理后，还会有较多实体组织细胞，所以不能全部圈。
2、建议你把原始数据或者图片结果传上来看 ...

老师您好，那这个实验调补偿时需要调哪几个补偿呢

niwanmao

路人丙 发表于 2015-9-23 21:44
老师您好，那这个实验调补偿时需要调哪几个补偿呢

一般原则上设CD4、CD25、foxP3单染这三管调节补偿，但考虑到foxP3的弱表达，可考虑去掉这管单染。