巨噬细胞吞噬实验圈门

亲亲蝴蝶飞

我现在正在做巨噬细胞吞噬荧光微球的实验 流式细胞仪是BD公司的C6   想知道怎么圈门？圈门的时候应该是空白组（只有细胞）还是阴性对照组（未处理细胞吞噬荧光微球）来设定？圈门的时候应该怎么选择？谢谢高手指点一二   实验中   太困惑了   谢谢啦

niwanmao

你的巨噬细胞原本是很纯的巨噬细胞还是有其它细胞混杂？有没有加巨噬细胞标记？

zy21318302

请问未吞噬部分，您是用台盼蓝猝灭吗？

亲亲蝴蝶飞

niwanmao 发表于 2015-6-24 09:40
你的巨噬细胞原本是很纯的巨噬细胞还是有其它细胞混杂？有没有加巨噬细胞标记？ ...

是取出骨髓后加入M-CSF培养出来的巨噬细胞   应该比较纯
是用CD68标记的巨噬细胞

亲亲蝴蝶飞

zy21318302 发表于 2015-6-25 13:54
请问未吞噬部分，您是用台盼蓝猝灭吗？

细菌需要猝灭   微球不需要

niwanmao

亲亲蝴蝶飞 发表于 2015-6-26 22:58
是取出骨髓后加入M-CSF培养出来的巨噬细胞   应该比较纯
是用CD68标记的巨噬细胞 ...

如果用CD68标记了，那么可以用CD68/FSC设门，然后再进行FSC/SSC设门。

亲亲蝴蝶飞

niwanmao 发表于 2015-6-26 23:39
如果用CD68标记了，那么可以用CD68/FSC设门，然后再进行FSC/SSC设门。

老师  您好  是如上图那样子吗？CD68是APC标记的！
然后是我一开始上传的那种图去圈？
老师没有QQ可以直接联系您啊？有点急   又不太会   希望赐教   谢谢

niwanmao

亲亲蝴蝶飞 发表于 2015-6-27 21:25
老师  您好  是如上图那样子吗？CD68是APC标记的！
然后是我一开始上传的那种图去圈？
老师没有QQ可以直接 ...

先如下图这么圈：


然后再在FSC/SSC散点图中圈。就差不多了。

亲亲蝴蝶飞

niwanmao 发表于 2015-6-29 08:42
先如下图这么圈：
先在APC-FSC图上圈门名为P4。
在FSC-SSC图上选择P4门，再圈门名为P1。

             然后在SSC-A--SSC-H图上选择P1 in P4 ,圈门为P2----------此步骤是为了选取单个的巨噬细胞，去除粘连的细胞。              
在APC-FITC图上选双阳性部分，使得CD68 Isotype荧光值为0（下图一），看样本荧光值（下图二）。

老师   请问一下 圈门应该以哪种样本来圈？阴性对照？还是空白组？
空白组只有细胞，和其他组吞了微球的细胞大小是不一样的，所以不应该以空白组来圈门吧？
每一次实验的每一个样本都应该重新圈门还是以所有的实验统一圈门？
因为我的细胞是原代细胞，每次做每次取，可能每次的状态会有一些差距。。。

niwanmao

亲亲蝴蝶飞 发表于 2015-6-29 16:28
然后在SSC-A--SSC-H图上选择P1 in P4 ,圈门为P2----------此步骤是为了选取单个的巨噬细胞， ...

你的微球是FITC荧光的吗？你要检测的是CD68表达率是吗？最好每次做一个吞噬微球和标记同型对照的设门参照。