多色流式分析荧光素该如何设计

xiehou315

本人以前主要从事流式临床应用，方案都是厂家设计好的。最近我要检测B细胞表面的8中表面分子，多色流式分析荧光素该如何设计？我们打算用BD LSRII 流式细胞仪来检测，请问该如何设计荧光素？求各位大师指教！

chymanhz

对于流式检测最初的一步就是选择何种方法，通常是何种荧光物质标记的抗体。厂家根据需要开发了各种荧光标记的抗体，进行选择时首先要满足的就是所选择的抗体必须在流式上能够检测，各单位买的流式仪功能不完全一致，首先要和检测方进行联系，看能否检测。有几个原则一起说一下：
1 流式检测时首推荧光物质直接标记的抗体，如果没有直接标记的抗体，用间接发，即二抗上标记荧光分子同样可以。不过这增加了处理的难度，处理步骤增多，往往会不同程度影响检测结果。
2 厂家推出的抗体有一些明确写明适合流式检测，而另一些则表明适合免疫组化、western等，首选前者，可以保质保量，但是后者并不是不可以用，一般来说如果没有明确的表明适合流式检测的抗体，采用后者也是可以的，不过要注意其检测结果不一定非常理想。
3 单抗和多抗均可应用。
4 绿色荧光蛋白等本身有荧光的物质在检测时会占据一个荧光通道，我也曾碰到几次有人将转了绿色荧光蛋白的细胞再采用FITC标记的抗体来检测目的蛋白（据说还有人用此方法得出了满意的结果！），岂不知绿色荧光蛋白和FITC是一个荧光通道，更本不能一起检测。
5 如果是检测淋巴细胞这类细胞，经常用到多种抗体同时标记，选择时切勿选错。我自己比较倾向于多重标记，因为这样可以减少抗体和细胞用量，特别是对于小鼠的血标本，经常采到的血量微少，采用多重标记更有利。当然这要求流式操作者有较高的水平，注意调节流式仪的各种参数。

xiehou315

看来下论坛里的《多色流式优化方案3：人记忆性B细胞的表型分析》
我除了要检测里面的IgD，CD24，CD21，CD38，CD27，还要加染CD23、IgG、IgM，我能否把其中的几种替换成我要加染的？

niwanmao

xiehou315 发表于 2015-7-21 10:22
看来下论坛里的《多色流式优化方案3：人记忆性B细胞的表型分析》
我除了要检测里面的IgD，CD24，CD21，CD38 ...

可以的。

xiehou315

谢谢倪老师！

chymanhz

以上为转载

xiehou315

最近查阅资料，发现有人提到，在流式方案选择上，尽量选择“一管也只能用一个biot的Ab”，想问问大家这里说的biot指的是什么啊？

niwanmao

xiehou315 发表于 2015-7-23 15:26
最近查阅资料，发现有人提到，在流式方案选择上，尽量选择“一管也只能用一个biot的Ab”，想问问大家这里说 ...

理解不了。出处在哪儿？