Treg的流式检测问题

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各位老师同学，帮忙看一下为什么我做的treg是这个样子，如图在第一和第三象限总是有乌七八糟的东西，怎么解决啊 ，做了好久老是这样。细胞是小鼠的脾脏淋巴细胞，在体外cona活化培养3天上机检测。

niwanmao

建议加用死活染料排除死细胞。死细胞会导致大量的非特异性染色。

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niwanmao 发表于 2015-9-16 20:47
建议加用死活染料排除死细胞。死细胞会导致大量的非特异性染色。

你好，倪老师，死活染料是PI （propidium iodid）染料吗，我们平时做凋亡坏死用的这个染料可以吗？是不是染上这个抗体，第一步排除下死细胞就可以啦？

小憨

366722485 发表于 2015-9-17 10:07
你好，倪老师，死活染料是PI （propidium iodid）染料吗，我们平时做凋亡坏死用的这个染料可以吗？是不是 ...

并不是，是要用类似与Annexin V的一种标记物来区分活死，在life tech公司有卖的。
在做胞内细胞染色的时候细胞已经固定破膜了，已经是死细胞了，所以不能用PI区分固定前细胞的死活。

niwanmao

366722485 发表于 2015-9-17 10:07
你好，倪老师，死活染料是PI （propidium iodid）染料吗，我们平时做凋亡坏死用的这个染料可以吗？是不是 ...

最好是购买商业化的live/dead鉴别染料。实在为节约成本起见用PI染料，切记用低浓度PI，并且在上机前5分钟染一下即可。