临床检验配色及试剂选择

小憨

给位老师，我现在要做三组指标的检测：1. CD3、4、8， 2. CD3、CD19， 3. CD3、CD16、CD56
请问各位临床检验的老师，在临床上流式有没有首选的marker检测方案？比如CD8分子有CD8a和CD8b两条链，以检测哪条链为主？在流式抗体的选择上，同一种marker有多个克隆的抗体可以选择，是不是有首选克隆和品牌以供QC？在配色上有什么讲究？
另外，临床上的流式检测和科研的流式检测有什么不一样？有没有SOP之类的要求？

niwanmao

小憨 发表于 2015-10-15 15:12
我担心临床上检测是不是有一定的SOP以保证结果的可重复性，也不是说纠结于细节。若规定用哪种克隆的抗体 ...

目前国家疾控中心出了一个淋巴细胞亚群的标准，只提到了抗体，没有具体的克隆号。

niwanmao

你要做的目的是什么？一般CD8直接选择CD8，除非你有特殊要求可能需要选择CD8a。

至于配色，需要根据你的仪器配置。至于克隆号，我的建议是可以参考文献。因为你做的这几个标记都非常常用，已经很成熟，基本上不同克隆之间相差不大。

标记就直接按照表面抗体标记做即可，没有特殊要求。

小憨

niwanmao 发表于 2015-10-14 13:53
你要做的目的是什么？一般CD8直接选择CD8，除非你有特殊要求可能需要选择CD8a。

至于配色，需要根据你的仪 ...

其实是一个淋巴细胞亚群的分群检测，测定也就是CD4、8，T、B、NK的相对数量吧，我们收的是临床样品，做盲样检测。

niwanmao

小憨 发表于 2015-10-15 10:40
其实是一个淋巴细胞亚群的分群检测，测定也就是CD4、8，T、B、NK的相对数量吧，我们收的是临床样品，做盲 ...

嗯，那只需要使用常见的克隆号即可。CD8就不要选择CD8a了，直接用普通的。

chymanhz

niwanmao 发表于 2015-10-15 11:15
嗯，那只需要使用常见的克隆号即可。CD8就不要选择CD8a了，直接用普通的。
...

看到刚好弱弱问一下，CD8和CD8a有什么区别？是不是人就基本上CD8，老鼠多用CD8a？是大多数胸腺细胞和成熟abTCR T细胞表达CD8ab，而γδ TCR T细胞，肠上皮间淋巴细胞和DC细胞表达CD8a？

chymanhz

不好意思，少打了个a，最后一个是CD8aa

niwanmao

chymanhz 发表于 2015-10-15 11:56
看到刚好弱弱问一下，CD8和CD8a有什么区别？是不是人就基本上CD8，老鼠多用CD8a？是大多数胸腺细胞和成熟 ...

CD8和CD8a的选择其实不需要纠结过多吧，主要还是看自己要研究的细胞亚群。小鼠貌似确实CD8a用的多一些。

小憨

chymanhz 发表于 2015-10-15 11:56
看到刚好弱弱问一下，CD8和CD8a有什么区别？是不是人就基本上CD8，老鼠多用CD8a？是大多数胸腺细胞和成熟 ...

CD8分子是由α和β两条链组成的，一般的抗体只结合抗其中的一条链。在肠道中的γδ T细胞确实存在同二聚体的CD8分子，也就是CD8aa或αα。
一般的CD8抗体都是其实都是CD8a，我查了一下。

小憨

niwanmao 发表于 2015-10-15 12:51
CD8和CD8a的选择其实不需要纠结过多吧，主要还是看自己要研究的细胞亚群。小鼠貌似确实CD8a用的多一些。 ...

我担心临床上检测是不是有一定的SOP以保证结果的可重复性，也不是说纠结于细节。若规定用哪种克隆的抗体的话，我要是用错了，那报告直接就是无效的，样品又没法保存，也无法补救了。