PMA导致CD4内吞原理

弥勒

倪老师，您好！
      做人Th17的流式检测时，用PMA刺激4小时候，会导致CD4分子的内吞，这个有没有相关文献报道呢？具体原理是什么？假如同时做Th17和Treg，能否先表面染色CD4和CD25，然后再刺激后，染Th17和Foxp3呢，这样能否避免CD4分子的内吞，期待您的回复。

niwanmao

主要是影响钙离子水平，通过钙调蛋白引起的内吞，请参见：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2109010

解决方案是有两种：
1、就是你所说的，先染CD4，但CD25可以不染，然后再刺激。但效果未知，需要验证。
2、第二种就十分靠谱，就是进行固定、破膜，染胞内的CD4。

弥勒

niwanmao 发表于 2015-10-21 15:17
主要是影响钙离子水平，通过钙调蛋白引起的内吞，请参见：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2109010

解 ...

好的，谢谢倪老师。

弥勒

niwanmao 发表于 2015-10-21 15:17
主要是影响钙离子水平，通过钙调蛋白引起的内吞，请参见：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2109010

解 ...

倪老师，您好！
     还有个问题，先染了CD4后，再刺激，就不会内吞了吗？我做出来的结果，是CD4几乎没有阳性了。

niwanmao

弥勒 发表于 2015-10-21 15:53
倪老师，您好！
     还有个问题，先染了CD4后，再刺激，就不会内吞了吗？我做出来的结果，是CD4几乎没有 ...

所以我说第一种方法不保证有效，需要验证。第二种方法是绝对可用的，而且你刚好要做IL17和foxP3，需要破膜，可以跟这两个标记一起做胞内染色。

bimawenlaile

目前的方案一般是反标，标出CD3 和 CD8，CD3+CD8-细胞为CD4，这样就没有这种问题了（在人标本中）

niwanmao

bimawenlaile 发表于 2015-10-24 23:09
目前的方案一般是反标，标出CD3 和 CD8，CD3+CD8-细胞为CD4，这样就没有这种问题了（在人标本中） ...

这种反向标定其实是不准确的，你随便取一份人外周血标标看，会看到一些CD4、CD8双阳性和一些CD4、CD8双阴性的，尽管比例不高，但还是有的。

Deanou

PMA会导致CD4内吞的话请问是否可以换用CD3/28刺激活化取代PMA/lono

niwanmao

Deanou 发表于 2020-7-7 13:45
PMA会导致CD4内吞的话请问是否可以换用CD3/28刺激活化取代PMA/lono

可以刺激，但是有些指标不一定有PMA和离子霉素效果好。