非特异性反应消除手段和流式图右移

yangswmy · 发表于 2016-5-11 10:47:04

我做流式是用的间接法，空白对照正常，一抗孵育PBS、二抗孵育sigma家的FITC标记抗体的阴性对照往外拖出一个尾巴，阳性比例大概在百分之十几。有什么办法消除这个非特异性反应吗？
有时做流式时，流式图会发生右移的现象，应该怎么办？
求大神指教

Victorrwang · 发表于 2016-5-11 11:26:17

具体的问题没有看懂。但是总体来说，消除非特异性反应可以：
1. 一般的staining buffer 用的是PBS＋3%BSA.
2. 另外，在染色前加fc blocker

bernie1023 · 发表于 2016-5-11 12:45:14

补充楼上的，除了加Fc阻断剂，也可以用二抗来源的血清封闭一下。另外，阴性对照最好用一抗相应的同型对照，而不是PBS，这样得到的结果更准确。

niwanmao · 发表于 2016-5-11 16:06:49

空白对照一般都说明不了问题。
你所说的阴性对照拖尾，实验标本有没有拖尾？

yangswmy · 发表于 2016-5-16 21:59:32

谢谢各位的意见，我楼上说的方法再试试

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[标本处理] 非特异性反应消除手段和流式图右移