关于间接染色顺序问题

SZYD

染核内因子，有三个抗体，其中一个没有找到直接标记的抗体，就买的是生物素标记的抗体，然后用链亲和素标记，我想问问我应该怎么染，是先加所有抗体染之后再加那一个亲和素，还是先加亲和素染再加三个抗体，加亲和素的时候需要孵育多长时间？谢谢各位

niwanmao

链亲和素感觉应该是ELISA上用的二抗啊，你为什么不买荧光标记的二抗？

SZYD

niwanmao 发表于 2016-5-18 14:48
链亲和素感觉应该是ELISA上用的二抗啊，你为什么不买荧光标记的二抗？

是带荧光的链亲和素，因为一抗找不到属种来源都不同的才买的生物素标记的一抗，现在不太清楚标记的顺序

niwanmao

SZYD 发表于 2016-5-19 09:29
是带荧光的链亲和素，因为一抗找不到属种来源都不同的才买的生物素标记的一抗，现在不太清楚标记 ...

其实如果买不到直标的抗体，可以自己买一个荧光素标记试剂盒和无荧光的抗体，自己标，这是最好的，间标存在太多变数。

要做的话，建议先做亲和素间标，标完之后，再做另外两个直标。

dragonhzqsmmu

niwanmao 发表于 2016-5-19 09:48
其实如果买不到直标的抗体，可以自己买一个荧光素标记试剂盒和无荧光的抗体，自己标，这是最好的，间标存 ...

您提及的“自己买一个荧光素标记试剂盒和无荧光的抗体，自己标”有没有具体的可参考的protocol？

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2016-5-19 11:24
您提及的“自己买一个荧光素标记试剂盒和无荧光的抗体，自己标”有没有具体的可参考的protocol？ ...

标荧光素现在有现成的商品化试剂盒，一搜一大堆呢，我记得最有名的好像就是那个Lightening啥来着

SZYD

niwanmao 发表于 2016-5-19 11:27
标荧光素现在有现成的商品化试剂盒，一搜一大堆呢，我记得最有名的好像就是那个Lightening啥来着 ...

好的，谢谢