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[流式分选] 小鼠加刺激剂后CD4分选不出来怎么办?

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发表于 2016-8-9 16:35:51 | 显示全部楼层 |阅读模式
5流星
求解答!
我在做4个细胞的流式:th17,treg,th9跟th22。
treg不用加BFA、PMA刺激剂CD4能分得出来,而TH9、th17、th22这三个细胞需要用PMA、BFA刺激4-6小时,做了4次流式,CD4都分不出来。
请问这是什么问题?刺激剂会影响小鼠CD4的表达跟标记吗?
(PMA跟BFA用的都是联科的)

th9

th9

treg

treg
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发表于 2016-8-9 21:39:03 | 显示全部楼层
刺激后CD4发生内吞,所以会导致CD4很难分群,从图上看是有的,只是分不开。
建议:
1、改用CD3+CD8-代替,尽管会不太准确,但作为替代也是可以的。
2、试试固定破膜后染胞内的CD4。
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 楼主| 发表于 2016-8-12 15:21:55 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-8-9 21:39
刺激后CD4发生内吞,所以会导致CD4很难分群,从图上看是有的,只是分不开。
建议:
1、改用CD3+CD8-代替 ...

老师,是将第③步的CD4孵育跟第④步的用A液孵育换一下顺序吗?先破膜再孵育会不会对CD4的标记有影响呢?
178104807532660094.jpg
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发表于 2016-8-12 20:01:00 | 显示全部楼层
DanlionChy120 发表于 2016-8-12 15:21
老师,是将第③步的CD4孵育跟第④步的用A液孵育换一下顺序吗?先破膜再孵育会不会对CD4的标记有影响呢? ...

这两个是破膜剂?如果是的话,不是调换,而是把加CD4那步和IL-17、IL-22抗体一起加。
你知道活性/增殖/凋亡/焦亡/自噬的区别吗?——点击了解细胞健康检测全面方案
 楼主| 发表于 2016-8-14 22:09:04 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-8-12 20:01
这两个是破膜剂?如果是的话,不是调换,而是把加CD4那步和IL-17、IL-22抗体一起加。 ...

好的,明天再试一下,谢谢老师。
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发表于 2019-12-19 19:46:56 | 显示全部楼层
DanlionChy120 发表于 2016-8-14 22:09
好的,明天再试一下,谢谢老师。

您好,请问一下您刺激后对CD3的表达或分群有影响吗?
你知道活性/增殖/凋亡/焦亡/自噬的区别吗?——点击了解细胞健康检测全面方案
发表于 2021-7-19 09:40:53 | 显示全部楼层
DanlionChy120 发表于 2016-8-14 22:09
好的,明天再试一下,谢谢老师。

求回复啊。看了很多帖子,说是可以尝试固定破膜后染CD4,但是都没有反馈……
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