做酵母分选的时候如何确定分选下来的是单个的酵母细胞？

huananlou101

大家好，我是新手。因为实验需要用到单个细胞，老板让我用96分出单个酵母培养，但是其中有个很严重问题是我没法确定我分下来的一定是单个的酵母细胞。大家有什么好的办法么？

niwanmao

huananlou101 发表于 2016-8-25 14:50
你好，我用的是Moflo XDP流式细胞分析分选仪，我的目标是每个孔里面都是单个细胞，不是单一性质的细胞。 ...

咨询过Beckman的技术，可以这么设置，然后再用FSC-A/H设门。

niwanmao

单细胞分选有专门的分选仪器，或者用微液流。如果用传统分选仪，通过FSC-A/H应该也可以吧，不过你的意思是每个孔分出一个酵母 还是分选出一堆性质单一的酵母

huananlou101

niwanmao 发表于 2016-8-24 19:40
单细胞分选有专门的分选仪器，或者用微液流。如果用传统分选仪，通过FSC-A/H应该也可以吧，不过你的意思是 ...

你好，我用的是Moflo XDP流式细胞分析分选仪，我的目标是每个孔里面都是单个细胞，不是单一性质的细胞。但是我没法确定它是。可以调整什么参数么？我选择的是single ,0.5

huananlou101

niwanmao 发表于 2016-8-25 19:56
咨询过Beckman的技术，可以这么设置，然后再用FSC-A/H设门。

谢谢倪师兄，就是我无法确定是打入的是单个细胞。有相关文献支持么？我老板希望能够得到 直观的证明打入的是单个细胞的证据。谢谢！

niwanmao

huananlou101 发表于 2016-8-25 21:19
谢谢倪师兄，就是我无法确定是打入的是单个细胞。有相关文献支持么？我老板希望能够得到 直观的证明打入 ...

那么就打入之后，在倒置显微镜下观察嘛

huananlou101

niwanmao 发表于 2016-8-25 21:45
那么就打入之后，在倒置显微镜下观察嘛

试过了。。。没找到。。干得太快。。。。。QAQ。。我再多试几次。。。。。。

niwanmao

huananlou101 发表于 2016-8-26 09:01
试过了。。。没找到。。干得太快。。。。。QAQ。。我再多试几次。。。。。。 ...

孔里面你没有加什么PBS或培养基吗？

huananlou101

niwanmao 发表于 2016-8-26 12:32
孔里面你没有加什么PBS或培养基吗？

没用96孔板看，因为96孔板底部太厚了。把它打到载玻片上找的。没找到。

niwanmao

huananlou101 发表于 2016-8-26 14:18
没用96孔板看，因为96孔板底部太厚了。把它打到载玻片上找的。没找到。

分选有时候成功率是不高，不可能每个液滴都会包含细胞的，只能多试试吧