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[流式相关软件] 流式直方图不是正态的怎么调整

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发表于 2016-12-26 09:16:37 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决

倪老师及各位战友:我最近在做DC的表型鉴定(标本是小鼠骨髓细胞诱导分化的原代DC),结果从数值上来说是有意义的,但是流式直方图一直做不好,图形不是正态分布的,原来一直怀疑是染色的问题所以重复了很多次,但是还是没有好的结果,现在比较迷茫不知道是染色、标本处理的问题还是软件用的不对(flowjo 10)~请大家指导

附图:图左是别人文献里的图,图右是我自己做的图,使用的双参数转换。

这是别人文献里的图

这是别人文献里的图

这是我做出来的图

这是我做出来的图

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发表于 2016-12-26 12:52:33 | 显示全部楼层
可能是你的样品细胞均一性不好吧,DC细胞不纯造成的,你的图是已经gate在DC细胞中了吗?
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 楼主| 发表于 2016-12-26 12:56:35 | 显示全部楼层
小憨 发表于 2016-12-26 12:52
可能是你的样品细胞均一性不好吧,DC细胞不纯造成的,你的图是已经gate在DC细胞中了吗? ...

恩,这已经是用磁珠提纯以后的细胞做的了
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发表于 2016-12-26 19:37:54 | 显示全部楼层
小兔子乖乖 发表于 2016-12-26 12:56
恩,这已经是用磁珠提纯以后的细胞做的了

建议看一下FSC/SSC散点图看看。
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发表于 2016-12-27 17:25:30 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-12-26 19:37
建议看一下FSC/SSC散点图看看。

1. 虽然是磁珠分选,但是分选完成也可能有不高的时候,建议还是用流式测一下纯度。
2. Fc blocker封闭一下会不会有影响,倪老师觉得呢?

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发表于 2016-12-27 18:19:54 | 显示全部楼层
小憨 发表于 2016-12-27 17:25
1. 虽然是磁珠分选,但是分选完成也可能有不高的时候,建议还是用流式测一下纯度。
2. Fc blocker封闭一 ...

从这个直方图的荧光分布看,我个人总觉得:
1、你说的细胞纯度问题,可能把碎片也圈进去了,所以希望楼主能够看一下FSC/SSC的设门。
2、电压或补偿问题,例如第一个图蓝色直方图偏左,会不会因为电压太低或补偿过大,压线造成这个形态分布?
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 楼主| 发表于 2016-12-28 08:19:49 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-12-27 18:19
从这个直方图的荧光分布看,我个人总觉得:
1、你说的细胞纯度问题,可能把碎片也圈进去了,所以希望楼主 ...

倪老师,流式检测CD11c的纯度还是不错的,都在90%以上;细胞群体确实存在不少碎片, 我理解的是左下角那一坨不知道对不对,圈门的时候确实没有圈进去,但是主细胞群体也分俩群不知道为什么,这个图左边的细胞群体还算少,有的直接就均分成俩群了。。。下面是圈门的策略,您看看有啥问题~

圈门策略

圈门策略

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发表于 2016-12-28 16:26:07 | 显示全部楼层
小兔子乖乖 发表于 2016-12-28 08:19
倪老师,流式检测CD11c的纯度还是不错的,都在90%以上;细胞群体确实存在不少碎片, 我理解的是左下角那 ...

是否可将各个通道散点图都放上来看看?我担心CD80那种分布形式是补偿问题造成。
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 楼主| 发表于 2016-12-28 21:04:02 | 显示全部楼层

MHC散点图

MHC散点图

CD80散点图

CD80散点图

CD88散点图

CD88散点图

补偿值表1

补偿值表1

补偿值2

补偿值2


倪老师,上图分别是CD11c门下不同指标的的散点图和补偿值,您看看有啥问题~辛苦啦!
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 楼主| 发表于 2016-12-28 21:04:54 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-12-28 16:26
是否可将各个通道散点图都放上来看看?我担心CD80那种分布形式是补偿问题造成。 ...

倪老师,详见上个回复呦~(∩_∩)
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