抗体滴定

tangjingling

最近在做几个方案的抗体滴定，遇到几次分群不明显，整体偏移的情况，请问大家为什么会出现这种情况？使用Staing Index 计算后确定的最佳浓度检测结果与预期不符怎么办？

niwanmao

CD183不是在辅助T里面分群应该是很清楚的吗？如果这样的话可能可能抗体本身不好吧。
不过Protein L我没做过，不太清楚表达模式如何，建议找一个可以高表达该抗原的细胞进行滴定。

tangjingling

niwanmao 发表于 2017-2-13 14:52
CD183不是在辅助T里面分群应该是很清楚的吗？如果这样的话可能可能抗体本身不好吧。
不过Protein L我没做过 ...

倪老师，CD183我做过两次，一次是用PBMC滴定的分群不明显，所以查找文献说经过刺激活化后的T细胞高表达，所以用CD3CD28的磁珠刺激PBMC3-5天后再进行滴定，结果就是第一张图，分群仍然不明显！所以是考虑抗体不好吗？
Protein L是用了二抗的，不是直标抗体，是经过转染后的细胞，我有阳性GFP对照，显示转染率并不高，约5%,但Protein L检测后整体往右移了，所以不知道是本身表达很高还是染色的问题？？？

niwanmao

tangjingling 发表于 2017-2-13 15:15
倪老师，CD183我做过两次，一次是用PBMC滴定的分群不明显，所以查找文献说经过刺激活化后的T细胞高表达， ...

CD183我平时都在用，直接正常人或病人的外周血T细胞中都可以很好分群，所以我认为应该是抗体问题。
至于ProteinL整体右移也是不太像真正阳性的感觉，需要看看资料图片看。

yuemin5

niwanmao 发表于 2017-2-13 19:41
CD183我平时都在用，直接正常人或病人的外周血T细胞中都可以很好分群，所以我认为应该是抗体问题。
至于P ...

阴性群整体右移很奇怪，随着抗体浓度的增加，阴性细胞群是会有右移的情况。但是为什么这个图变化那么大？