求助CFSE检测T细胞增殖

Jing310

这批T细胞都是统一做CFSE染色（ebioscience），然后分到96孔板中，加不同刺激物，培养到第七天时候检测，每隔三天加液体；
染色：CD3-percp，CD4-PE，CD8-PE-CY7，Live/DEAD
图一是T细胞未加刺激物，图234是加了刺激物，图5是分群情况，图6为未染色T细胞
1 奇怪的是增殖之间隔的很远，想问下这种情况是检测时间太晚，增殖太狠还是流式电压没调好？还是其他原因？
按理说图1都是全染上的，不存在后面的图234没染上的情况
2 论坛里下的flowjo没找到分析增殖的平台啊？是否缺失？3 图5的第一副图，左边有很多碎片和凋亡细胞，是否是T细胞凋亡的？

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whyxa

1，CFSE 染色标记没问题，T cell 刺激增殖也很明显，流式电压没问题，挺好，相隔很远说明细胞增殖明显，2，我不清楚你的标本是人血还是鼠血，我的经验来说，人血很少有典型的CFSE增殖代分布的，也就是那个flowjo的分析增殖的拟合曲线基本没办法使用，你可以采用其他方法分析增率，3，是否存在T细胞凋亡不好说，我不知道你有没有添加IL-2一起刺激培养，既然你有染Live/Dead来除去死细胞，你第一个设门可以适当的扩大一些。

ghqiu09

whyxa 发表于 2017-4-28 04:27
1，CFSE 染色标记没问题，T cell 刺激增殖也很明显，流式电压没问题，挺好，相隔很远说明细胞增殖明显，2， ...

请问老师，人PBMC很少有典型的增殖峰图，那正常情况下的峰图应该又是长什么样子的呢？我之前做过，的确没有做出来过典型的峰图。谢谢！

Jing310

whyxa 发表于 2017-4-27 15:13
1，CFSE 染色标记没问题，T cell 刺激增殖也很明显，流式电压没问题，挺好，相隔很远说明细胞增殖明显，2， ...

我是人PBMC，这次是7天测的，下次5天试试看

whyxa

ghqiu09 发表于 2017-4-27 16:57
请问老师，人PBMC很少有典型的增殖峰图，那正常情况下的峰图应该又是长什么样子的呢？我之前做过，的确没 ...

我不明白你说的正常情况下的峰图是什么意思，是正常的人PBMC增殖的CFSE的图呢 还是典型的CFSE分代的图呢？我做过的比较能看出代的也有，不是很多，我不知道怎么添加图片到回复中，所以没办法show给你看，你如果想知道，你可以加我QQ：602203156

羊芈芈

我想请问下，图234最左边的峰是增殖后的细胞的峰呢还是死细胞啊？

niwanmao

羊芈芈 发表于 2018-5-9 09:54
我想请问下，图234最左边的峰是增殖后的细胞的峰呢还是死细胞啊？

可能是碎片，也可能是死细胞

羊芈芈

niwanmao 发表于 2018-5-9 14:14
可能是碎片，也可能是死细胞

好的，谢谢

于小鱼0516

Jing310 发表于 2017-4-28 09:55
我是人PBMC，这次是7天测的，下次5天试试看

我也在做这个最近，但是只用CD3刺激，4天之后看并没有增殖，请问刺激条件要改吗？

Jing310

于小鱼0516 发表于 2018-8-21 12:24
我也在做这个最近，但是只用CD3刺激，4天之后看并没有增殖，请问刺激条件要改吗？ ...

CD3+IL2，到第八天左右能看到