寻找Treg——已更换抗体

cocoyan

之前发过两个帖子，PE-Foxp3分群均不理想，
后来找厂家换了Foxp3的抗体，
这是新作的图，自己感觉还是不好；
最后一张是咱流式中文网新型破膜剂的试用装，对CD4的影响挺大的


我的颜色对抗体分别为FITC-CD4   APC-CD25   PE-Foxp3

niwanmao

我觉得分群还可以啊。

Memmagician是否处理步骤上的问题？我平时临床标本都在用，从来没这样过。能否将Sample和Memmagician的两个FCS文件传上来，我看看原因。

cocoyan

老师这是当时做的FCS格式的文件

cocoyan

niwanmao 发表于 2017-5-3 19:30
我觉得分群还可以啊。

Memmagician是否处理步骤上的问题？我平时临床标本都在用，从来没这样过。能否将Sam ...

老师，您再帮我看看这个分群可以吗？

niwanmao

cocoyan 发表于 2017-5-3 22:26
老师这是当时做的FCS格式的文件

逐一解释数据吧。首先看其中的Sample管，1分钟不到获取55000个信号：


而在测试MemMagician的时候，刚好你们的机器液路出了问题（见下图），1分多钟才取了5万3千多个信号，而且出现液流不稳定，这就严重影响到了其它信号：


所以，你后面看到了如下图这样乱七八糟的图形：

所以，只要你是按照MemMagician说明书做的，那么正常情况下是不可能出现分群不清的。所以你看到的分群不清的情形，恰好是机器出了问题，凑在一起，你误会了MemMagician：）。我们平时无论是临床还是科研标本，都测试过不少样本，表面信号都比其它破膜剂保留的要好。不过需要特地说明一下的是，目前试用装的MemMagician是只能破胞膜，不能破核膜的，所以不建议用在核内标记检测上，因此foxP3暂时不能用MemMagician试用装做，目前只有胞内的抗原是可以的。


最后看一下你Sample管的分群，我看了下还是不错的，如下图：

cocoyan

niwanmao 发表于 2017-5-4 12:24
逐一解释数据吧。首先看其中的Sample管，1分钟不到获取55000个信号：

老师，这个P2门是您根据同型对照画出来的吗？
我这边流式的老师说我根据同型对照把十字门画出来就不能再动了，样本Q2群就是CD4CD25foxp3细胞，
但是我发现我的SAMPLE样本的细胞团比同型对照明显要发生位移。
所以我真的不知道怎么圈Treg群，我在第三张图上根据肉眼圈出Treg细胞群，但是我这边流式实验室的老师说不对，而且我每一个标本都会调整Treg门，但是她不让调说门固定在那里就不能动了。
我在临床上收人的CD4CD25CD127-的Treg细胞时，都是在CD4细胞下看分成两团的细胞，Treg门并不是一成不变的。
真的不知道怎么办。
这边流式老师主要是做周期跟凋亡的，我觉得免疫这块她们不是很懂，但是我也不是很懂

niwanmao

cocoyan 发表于 2017-5-5 19:06
老师，这个P2门是您根据同型对照画出来的吗？
我这边流式的老师说我根据同型对照把十字门画出来就不能再 ...

站内搜索同型对照，你就明白为什么不能用同型对照设门了。

whyxa

cocoyan 发表于 2017-5-5 03:06
老师，这个P2门是您根据同型对照画出来的吗？
我这边流式的老师说我根据同型对照把十字门画出来就不能再 ...

你老师说的不对，你的想法是对的，人与人之间是有很大的个体差异，每个标本的群都会有不同的表现，所以每个标本的Treg的群应该遵循生物学本身的阴性去设门，并不是一成不变的，要相信自己的眼睛，明显细胞群已经偏出门了，我们不能说门以外的就不是。