ROS用flowing分析结果请教

喵喵的兔子

各位前辈，之前用BD的流式仪做了ROS的检测，染料是DCFH，用flowing对结果进行了处理，可是不是太懂直方图叠加结果的意义，就是浓度2（绿色线）和浓度3（紫色线）的双峰有些不太一样啊，是什么意思？
还有那个数据表里要采用哪个数据呢？
@niwanmao
怎么的结果才表示有ROS的产生？

niwanmao

你这三个结果，百分比几乎没有变化，即使改用MFI，至少绿色和紫色我觉得肯定是绿色的MFI大，所以这里就存在矛盾。建议再重复两次，如果依然如此，并且你确保标本处理没有问题，那么就需要改实验方案了。

喵喵的兔子

niwanmao 发表于 2017-5-14 09:29
你这三个结果，百分比几乎没有变化，即使改用MFI，至少绿色和紫色我觉得肯定是绿色的MFI大，所以这里就存在 ...

非常感谢老师，我觉得是我上机时没有调好参数。请问老师做ROS的流式时要怎么调电压呢？还有我的结果图中为什么右边会出现一个小峰呢？

niwanmao

喵喵的兔子 发表于 2017-5-14 10:51
非常感谢老师，我觉得是我上机时没有调好参数。请问老师做ROS的流式时要怎么调电压呢？还有我的结果图中 ...

直方图看不出原因，需要结合FSC/SSC，以及散点图一起看。

beckman2017

喵喵的兔子 发表于 2017-5-14 10:51
非常感谢老师，我觉得是我上机时没有调好参数。请问老师做ROS的流式时要怎么调电压呢？还有我的结果图中 ...

我们做的时候 用不染DCFH的 细胞调整电压 将 直方图调至10E2 或者10E3以内，图跟你第2个图差不多 然后 上样。  一般 用染色的 对照细胞，设定bar。样品分析出来 是双峰  比你这上面的图更明显些 左峰表示 没有ROS的细胞，右边表示 产生ROS的细胞 。我们也做出来过单峰的，整体右移，论坛里有人讲过 跟上样时间有关系，我觉得 应该跟样品处理 有关系 。
不知道 有没有帮助。有不对的地方，希望老师们指正