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[功能检测] 小鼠外周血MDSC分析

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发表于 2017-8-19 00:05:12 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星

小鼠外周血物理参数图

小鼠外周血物理参数图

这是上一张图区域分出来后

这是上一张图区域分出来后
请问我这个是小鼠外周血裂解后的图,如果要做MDSC,应该选择哪一群细胞?是先溶血素裂解还是先加CD16封闭FCR,这个是先裂解的,不知道为什么后裂解我的碎片总是很多。
我的步骤是:
1血液中MDSC 的测定:
1. 小鼠断尾取血100ul左右
2. 加入红细胞裂解液500ul,裂解10min,PBS洗涤2遍(1500rpm,5 min)
3.移液枪吸取100ul抗凝血液,加入 4ul CDl6/32抗体,冰上封闭20分钟,然 后 加 APC-anti-mouse CD11b ,FITC anti-mouse ly-6CPE- anti-mouse ly-6G 5ul , 冰上孵育20分钟
4. 加入PBS1ml混匀后以1500r/min离心,弃上清,洗涤两次
5.  加入0.3ml PBS,流式



 楼主| 发表于 2017-8-19 10:35:36 | 显示全部楼层
自己顶一下,倪老师能帮忙看一下吗
?
发表于 2017-8-19 21:28:39 | 显示全部楼层
设门如下: 屏幕快照 2017-08-19 下午9.19.14.png

发表于 2018-9-8 22:48:58 | 显示全部楼层

请问倪老师,这样圈门的依据是什么呢?能不能详细讲解下呀~
发表于 2018-9-8 23:07:27 | 显示全部楼层
用的什么溶血素是否有固定剂?
没有固定剂的一个先溶后染
发表于 2020-6-2 16:44:13 | 显示全部楼层
抗体加这么多吗?是直接加不稀释的抗体5微升?还是稀释后的抗体?
发表于 2020-6-8 17:18:58 | 显示全部楼层
我们课题组专门做MDSC不知道你有什么问题
小鼠PBMC得到之后正常流式图是有3群细胞(淋巴,单核,粒)MDSC有两个亚群一种是PMN-MDSC属于粒细胞群位置另外一种是M-MDSC属于单核细胞群位置,因此圈门是单核+粒
先裂红我们用ACK,然后直接PBS终止离心,染色一般抗体在0.2ul/million就可以了。
发表于 2020-6-8 17:20:51 | 显示全部楼层
具体圈门策略是
CD11b阳性的细胞里圈6G+6Clo—PMN
6G-6Chi——M
发表于 2021-2-16 14:05:37 | 显示全部楼层

请问倪老师,第一张流式图中,SSC和FSC红色圈门旁边的细胞群什么细胞呀?为什么没有圈进去呢?
发表于 2021-2-17 12:01:59 | 显示全部楼层
菜根谭 发表于 2021-2-16 14:05
请问倪老师,第一张流式图中,SSC和FSC红色圈门旁边的细胞群什么细胞呀?为什么没有圈进去呢? ...

问题重复,已在另一个帖回答:
小鼠外周血中性粒细胞流式检测
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8920-1-1.html
(出处: 流式中文网)
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