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[结构和原理] 为什么在分析流式数据时,调节FL1和FL4通道的补偿需要考.....

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发表于 2017-9-4 18:47:39 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
在调节补偿时,细胞染了CFSE和7-AAD,为什么在分析时我调节这两个通道的相互补偿得不到和别人一样的图形,结果我一看发现别人不仅调了FITC通道对7-AAD通道的相互补偿,还调了FTIC对PerCP PE-CY7  PE PE-Texas Red的相互补偿,然后把补偿数据应用到样本,这才得到CFSE和7-AAD的图形,不然我怎么调CFSE和7-aad的补偿,怎么也得到和别人分析类似的图形。
所以我想问的是为什么分析CFSE和7-AAD的双通道荧光参数,还要调节他们与其他通道的补偿,只调他们之间的不就行了吗,这个很困惑,请高手详细解答一下哈~

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发表于 2017-9-5 17:24:31 | 显示全部楼层
依据我调节补偿的经验,在你保留空白通道的时候,分析补偿时空白通道是会影响你的染色通道间的补偿的,理论上未染色通道是不需要分析的,补偿都是0,但是有些人分析数据时发现空白通道和染色通道有补偿也会调节,而空白通道调节补偿后会影响其他通道的补偿值,会照成图形变化。但是即便这样也不会极大的改变你需要的图形的。只要你分析后得到的图形符合实际情况,没必要追求和别人的完全相同。你只染了两个通道,你就只需要调节这2个通道间的补偿就可以了。
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 楼主| 发表于 2017-9-6 20:53:29 | 显示全部楼层
我想成大牛 发表于 2017-9-5 17:24
依据我调节补偿的经验,在你保留空白通道的时候,分析补偿时空白通道是会影响你的染色通道间的补偿的,理论 ...

谢谢,我明白您的意思了。如果我染了5个通道,我是不是应该把这五个通道的补偿先调好,再去看某两个通道组成的十字象限图,对吧? 但是我有个疑问,我们在临床上并不会去做这五个通道的单染来调补偿,那这样的话,我分析其中两个通道荧光怎么办?
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发表于 2017-9-7 08:41:51 | 显示全部楼层
lgfffancy 发表于 2017-9-6 20:53
谢谢,我明白您的意思了。如果我染了5个通道,我是不是应该把这五个通道的补偿先调好,再去看某两个通道 ...

应该不用的,是不是别人的图其它通道也加抗体了?
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发表于 2017-9-7 08:41:57 | 显示全部楼层
lgfffancy 发表于 2017-9-6 20:53
谢谢,我明白您的意思了。如果我染了5个通道,我是不是应该把这五个通道的补偿先调好,再去看某两个通道 ...

预先在流式仪上调好电压和补偿后期分析时可以省很多事。你用单染管调节流式仪上的电压和补偿,如果后面的实验条件一致的话只需要做一次就好,这个时预设补偿,会写入你的文件里面。你获得数据后仍然可以用Flow Jo调节补偿,只是减少了补偿调整的程度和复杂程度而已。流式分析都是先调补偿,调好了才有利于分析和gating,为什么没有单染管就不能分析你需要的通道呢?
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 楼主| 发表于 2017-9-10 11:51:32 | 显示全部楼层
我想成大牛 发表于 2017-9-7 08:41
预先在流式仪上调好电压和补偿后期分析时可以省很多事。你用单染管调节流式仪上的电压和补偿,如果后面的 ...

为什么没有单染管就不能分析你需要的通道呢? 这里没看懂呢
是调补偿应该需要单染管才对吧
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 楼主| 发表于 2017-9-10 11:52:17 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-9-7 08:41
应该不用的,是不是别人的图其它通道也加抗体了?

其他通道没染,只是在检测时勾选了,相当于通道打开了的。
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发表于 2021-4-26 14:06:24 | 显示全部楼层
lgfffancy 发表于 2017-9-6 20:53
谢谢,我明白您的意思了。如果我染了5个通道,我是不是应该把这五个通道的补偿先调好,再去看某两个通道 ...

你是做临床的?
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