【调补偿】可以用之前做的电压不同的单标管调补偿吗？

zhangyy

求助一下各位老师：

      调补偿时，可以用之前做的电压不同的单标管调补偿吗？（本次单标没有染出来，想用上次染出来的另一个分子的单标管调，但是估计电压变了）

烟雨任平生

调节补偿的单染管必须有明显的阴阳性分群，一般比例在30-60%之间。可以用其他相同颜色的不同流抗来标记的

niwanmao

电压不同，补偿值也会不同。所以不能通用。

zhangyy

niwanmao 发表于 2017-11-26 17:34
电压不同，补偿值也会不同。所以不能通用。

谢谢老师！还想请教老师两个问题：

1）因为我有一个分子不好染出单标，可以用一个明确可以染出单标的其他分子做单标，上机时用一样的电压来调补偿吗？

比如，我想染PE-IL-17，但是单标之前没有染出来，我可以用PE-CD8a来用作PE通道的单标吗？


2）用FLOWJO自动调节补偿，事先需要用单标管先标记阳性群，但有的分子几乎看不到明显的阳性群，只能在裸细胞后延伸大概0.6%左右（如图），我可以将该分子的这延伸出的2%作为阳性群标记出再由flowjo自动调节补偿吗？

zhangyy

这是刚才的图（是否可以用单标管标记这样的阳性群用于flowjo调补偿）

niwanmao

zhangyy 发表于 2017-11-27 15:11
谢谢老师！还想请教老师两个问题：

1）因为我有一个分子不好染出单标，可以用一个明确可以染出单标的其 ...

1、可以。

2、如果没有阳性群，就不能用于计算补偿值，必须要用分开明显的阳性群来调节。

zhangyy

niwanmao 发表于 2017-11-28 08:03
1、可以。

2、如果没有阳性群，就不能用于计算补偿值，必须要用分开明显的阳性群来调节。 ...

老师您好，请您看一下我这张单标管标注的阳性群图，可以用来自动调节补偿吗

niwanmao

zhangyy 发表于 2017-11-28 09:28
老师您好，请您看一下我这张单标管标注的阳性群图，可以用来自动调节补偿吗 ...

不行

zhangyy

niwanmao 发表于 2017-11-29 13:55
不行

可是老师，我感觉还是能够看到比较明显的位移的...
我做的这个分子（PE-CD122）表达量就很低了...

图是这个分子的说明书：

我没能做出这么明显的位移...

还请老师指导一下，为什么不行啊，，不然之前实验都白做了

niwanmao

zhangyy 发表于 2017-11-29 16:04
可是老师，我感觉还是能够看到比较明显的位移的...
我做的这个分子（PE-CD122）表达量就很低了...

调节补偿，如果你的目标分子表达量低、表达强度不高，可以改用其它高表达的分子，只要同样荧光素即可。