BALB/c小鼠外周血FITC-anti mouse CD19流式染色

zzzzzzzz · 发表于 2018-1-8 12:44:10

用新买的biolegend的抗CD19抗体对小鼠外周血染色，发现最后的流式图CD19没有明显的分群而是表现为荧光右移，做了好几次实验都是如此，不知道是什么原因，求大神指导一下~操作步骤：小鼠眼眶采血（抗凝管），用PBS 1:1 稀释后加1mL红细胞裂解液，25min后离心弃上清留大概50微升（离心后可见管底部有少量白色沉淀），加抗体避光1h后，加buffer上机检测
附件中分别为Blank、Isotype、1号小鼠、2号小鼠、3号小鼠的流式染色图

图片 1.jpg

niwanmao · 发表于 2018-1-9 13:59:13

你试一下先染抗体，再裂解。

ghqiu09 · 发表于 2018-1-9 16:03:21

你破红的时候是多少倍的体积？室温？25分钟明显太长了，我说怎么感觉细胞这么小。你把图缩小一点看看，主细胞团应该在fsc 200万以上。
可以先染抗体，再破红固定上机

硕硕123 · 发表于 2021-3-20 21:56:56

我感觉配色不行吧，我用CD19 Pacific Blue ，B细胞分团很明显啊

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[标本处理] BALB/c小鼠外周血FITC-anti mouse CD19流式染色