小鼠肺癌组织分离肺癌细胞

Kimbryant

如何从小鼠肺癌组织中完全分离出肺癌细胞？有具体方案吗？

niwanmao

组织的分离，大多数以酶消化为主，参见手册：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5834-1-1.html

Kimbryant

niwanmao 发表于 2018-2-28 20:50
组织的分离，大多数以酶消化为主，参见手册：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5834-1-1.html ...

这个分离出来不完全是肿瘤细胞吧？

Kimbryant

niwanmao 发表于 2018-2-28 20:50
组织的分离，大多数以酶消化为主，参见手册：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5834-1-1.html ...

酶消化的话，会影响肿瘤细胞表面分子表达吗

niwanmao

Kimbryant 发表于 2018-2-28 21:06
酶消化的话，会影响肿瘤细胞表面分子表达吗

分离出来不全是肿瘤细胞，可通过相关标记来圈出来。

消化的浓度和时间需要掌握，确实会对某些标记可能有影响，是需要摸索的。
机械法的话，对于肺组织可能效果欠佳。

chevalierx

肺组织消化我自己用的是Roche的Collagease D，Sigma的Dispase I，DNase I。肺癌细胞通常应该在肺间质当中，即使要做分选或者密度梯度离心分离也是要做组织消化的。

Kimbryant

chevalierx 发表于 2018-2-28 21:15
肺组织消化我自己用的是Roche的Collagease D，Sigma的Dispase I，DNase I。肺癌细胞通常应该在肺间质当中， ...

怎么分肺癌细胞出来呢？单核细胞的话可以用Ficoll,那肺癌细胞用什么分选啊？

Kimbryant

niwanmao 发表于 2018-2-28 21:13
分离出来不全是肿瘤细胞，可通过相关标记来圈出来。

消化的浓度和时间需要掌握，确实会对某些标记可能有 ...

怎么分肺癌细胞出来呢？单核细胞的话可以用Ficoll,那肺癌细胞用什么分选啊？

niwanmao

Kimbryant 发表于 2018-2-28 21:41
怎么分肺癌细胞出来呢？单核细胞的话可以用Ficoll,那肺癌细胞用什么分选啊？ ...

分选，一般都是用特异性的标记，方法则可以用磁珠分选，也可以用流式分选，请参考这篇文章：Isolation of Epithelial, Endothelial, and Immune Cells from Lungs of Transgenic Mice with Oncogene-Induced Lung Adenocarcinomas

chevalierx

Kimbryant 发表于 2018-2-28 21:41
怎么分肺癌细胞出来呢？单核细胞的话可以用Ficoll,那肺癌细胞用什么分选啊？ ...

肺癌细胞估计要分选了吧，看你后续是否要继续培养，如果要继续培养的话建议磁珠分选，觉得单一marker特异性不高可以用不同的磁珠连续分选，但前提要求是细胞量相当大，因为磁珠的得率很低。如果不需要继续培养直接进行分析实验的，可以上流式分选，好处是可以一次性标记多个marker，而且得率会比磁珠稍好，但受限于分选仪器自身状态、喷嘴维护、样品处理等因素，流式分选的细胞可培养性可能会较磁珠差，并且如果公用流式分选的话，可能需要加大量的环丙沙星抑菌。