Th17细胞流式分选

爱学习的好孩子

老师，您好，我之前请教过您“人外周血Th17和Treg细胞流式分选”的问题，您建议我去看八色方案。Treg细胞的抗体标记，我已经明白了，因为我还要进行后续的检测，所以不能用破膜剂，所以我选择CD4、CD25、CD127就可以了。关于Th17我还有点不明白，我看到之前有帖子说“用流式测人外周血Th17必须刺激，不刺激测不出来”。您的帖子“细胞因子胞内染色的相关刺激方案”我也看了。还是不理解，不知道该怎么选择抗体标记以及刺激。谢谢您~

niwanmao

分选和检测不是一回事，检测的话，需要用PMA等刺激，使其胞内因子能够表达，从而破膜之后更好的检测到。
而你是需要分选和培养的，所以就不能进行破膜，可以用CD45、CD3、CD4、CXCR3和CCR6等表面标记组合起来进行分选。

aya9988

niwanmao 发表于 2018-8-3 08:09
分选和检测不是一回事，检测的话，需要用PMA等刺激，使其胞内因子能够表达，从而破膜之后更好的检测到。
而 ...

倪老师，检测TH17是不是可以选用CD3CD4CD183CD196?

niwanmao

aya9988 发表于 2018-8-18 21:20
倪老师，检测TH17是不是可以选用CD3CD4CD183CD196?

可以的。

aya9988

那倪老师，按照这个表面marker方案应该怎么来圈门呢？

aya9988

niwanmao 发表于 2018-8-19 13:04
可以的。

那倪老师，按照这个表面marker方案应该怎么来圈门呢？

sunny2829

CXCR3=CD183 CCR6=CD196

人外周血TH17marker：CD45+CD3+CD4+CXCR3-CCR6+

参考文献：Standardizing immunophenotyping for the Human Immunology Project .Nature Review.2012

aya9988

sunny2829 发表于 2018-9-27 10:46
CXCR3=CD183 CCR6=CD196

人外周血TH17marker：CD45+CD3+CD4+CXCR3-CCR6+

谢谢！You are nice!

mybiosciences

也可以刺激后用美天旎的il17抗体对分选，分选出来的是活细胞