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[视频] 半小时视频,帮你找出做好磷酸化流式的几个关键点

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发表于 2018-9-28 10:28:23 | 显示全部楼层 |阅读模式

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这是油管上的视频,主讲者是CellSignal技术支持,短短30分钟,言简意赅总结了磷酸化蛋白流式检测中的一些关键要点:
1、固定和破膜的方法选择:
Fig1.png Fig2.png
2、抗体结合位点,可影响检测结果:
Fig3.png

3、检测的时间点很重要:
Fig4.png


4、三种染色方式的对比,优选中间这种:
Fig5.png


5、有时候,当你发现表面标记不见了,两个解决方法,一是换另一克隆号的抗体,二是换固定和破膜剂:
Fig6.png



如此有价值的内容,这视频得好好看看,视频如下(请在电脑端观看):
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发表于 2019-1-11 15:38:38 | 显示全部楼层
incubation buffer , wash buffer 怎样影响流式结果?
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发表于 2022-8-3 09:52:19 | 显示全部楼层
倪老师,想问一下, 因为要看Treg 的 pSTAT5 signal, 要破两次膜, 那我这个 live/dead 什么时候染合适? 看paper 都是在 stimulate 前,把 live/dead 染上,再进行体外刺激, 这样是有什么好处么?
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发表于 2023-4-29 15:21:46 | 显示全部楼层
倪老师,其中有一点,视频中anti-CD3/28刺激后,流式还能用CD3抗体标记上
这一点,我在实际过程中做不到,用anti-CD3/28的抗体刺激PBMC后,CD3流式检测抗体就标记不上了
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 楼主| 发表于 2023-4-30 10:03:00 | 显示全部楼层
dongfangyao 发表于 2023-4-29 15:21
倪老师,其中有一点,视频中anti-CD3/28刺激后,流式还能用CD3抗体标记上
这一点,我在实际过程中做不到, ...

一般用plate-binding CD3/CD28,或者CD3/CD28 beads刺激。

可溶性直接刺激,是会导致结合不上,你在另一个帖子中提问,我回答了。
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