急！！！贝克曼MoFlo XDP 分选回收率低

茶花花

我使用MoFlo XDP进行分选，采用purify模式，软件上显示手机到100k的细胞，我将收集到的细胞，进行细胞计数，显示只有2k个。采用不同的样本验证过，机器显示和收到的细胞量级均差很多，这会是什么造成的呢？

liuruiluna

信息好少。 分选什么细胞，比例有多少，起始细胞量多少，用的什么速度分的。不知道现在新的moflo是否校准分选的液路（也就是确认液滴shot 进了 tube中央），分选细胞之后，有没有将收集管加液体充分离心？

niwanmao

我先声明，我没做过分选，但看过一些资料，所以斗胆回答一下，如不对，请见谅。

纯度和细胞得率，两者之间是个矛盾。
Purify模式为了照顾纯度，获取速度慢，同时丢失的细胞肯定多，所以显示的细胞数会与真实得到的细胞数相差比较大。如果你需要比较多的细胞，那还是得用Enrich模式。

茶花花

niwanmao 发表于 2018-11-13 21:55
我先声明，我没做过分选，但看过一些资料，所以斗胆回答一下，如不对，请见谅。

纯度和细胞得率，两者之间 ...

谢谢，倪老师，但是还是觉得数量过低啊，

sunzheng_99

我觉得你可以先分析好细胞荧光比例，加大细胞量，加大分选速度/浓度，也许会好  但是纯度和得率你知道的

茶花花

liuruiluna 发表于 2018-11-14 11:36
信息好少。 分选什么细胞，比例有多少，起始细胞量多少，用的什么速度分的。不知道现在新的moflo是否校准分 ...

分选的小鼠淋巴细胞，速度的话用压差1，eps 25000左右，收集管里放了液体的，四路是稳得

liuruiluna

我说的就是从这些方面去check一下，如果你全都做了，而且觉得自己操作没有任何问题，那就找机器的厂家问问嘛。

facetodog

大概理解你说的是什么样的情况，我这最近也出现这个问题，最好找工程师确认一下

a86856635

压差控制在0.3即可，就是跑微球校准的压差，细胞密度可以适当调高一些。编辑分选逻辑的时候要把最终门之前的母门都要选中（比如你最终的细胞门是R3，你需要把上级的R1和R2门也要选上，最终为R1&R2&R3）。这点非常重要，如果只选择R3则会把所有events中R3颗粒分选，而不会考虑R1和R2。其他方面注意液流打到收集管中间，收集管中加入适量的血清。

茶花花

liuruiluna 发表于 2018-11-15 10:22
我说的就是从这些方面去check一下，如果你全都做了，而且觉得自己操作没有任何问题，那就找机器的厂家问问 ...

好的，谢谢