关于PBMC培养基和刺激因子

ccoo11669

各位前辈好！
       我是一名神经科临床医师，最近想写一个关于视神经脊髓炎疾病的课题，该疾病目前已证实外周血和脑脊液的IL-6水平高，考虑与IL-6和Th17细胞相关。我计划提取并培养患者和正常人PBMC，在培养过程中加入IL-6或IL-6R阻滞剂，观察三日后，提取上清用流式进行细胞因子和Th17细胞水平的测定，问题来了。
1.培养基该如何选择，我查阅文献后，这方面文献比较少。有人用IL-2刺激时采取的培养基是RPMI，有的加青链霉素双抗，有的又加CD3CD28刺激，机理有些不懂，可以指教一下吗？
2.在单用IL-6R阻滞剂干预时，文献里的培养基有加了血清的AIM培养基，如果我分组不同，那么培养基不同是否会影响最后的结果。
谢谢各位老师！

niwanmao

1、培养PBMC的话，RPMI1640是最常用的，加青霉素和链霉素是常规的，避免细胞污染。至于CD3和CD28不需要，因为那是刺激淋巴细胞活化的，而你的实验目的是为了用IL-6刺激，最后检测Th17。
2、用和不用阻滞剂，培养基建议统一。

ccoo11669

niwanmao 发表于 2018-11-30 09:51
1、培养PBMC的话，RPMI1640是最常用的，加青霉素和链霉素是常规的，避免细胞污染。至于CD3和CD28不需要，因 ...

倪老师，再请教一下，
1.Th17细胞就是属于辅助淋巴细胞里的，为什么不能用CD3/CD28双抗刺激，让淋巴细胞长的更好哇？
2.请问倪老师，以前用过IL-6刺激培养过人PBMC么？不知道细胞成活率如何？好不好做？

从未做过这方面的实验，也无流失的基础，问的问题有些外行，希望倪老师不要笑话：）

niwanmao

ccoo11669 发表于 2018-12-1 13:53
倪老师，再请教一下，
1.Th17细胞就是属于辅助淋巴细胞里的，为什么不能用CD3/CD28双抗刺激，让淋巴细胞 ...

1、因为你的实验目的是用IL-6刺激，如果再用别的刺激，不就干扰了你的实验影响因素了吗？。
2、IL-6没用过，你可以试试吧。