JC-1结果分析问题

Bojack

最近又重新做了一次JC-1检测。CCCP 20uM处理细胞30min；药物诱导细胞4H后检测。
请问各位老师：
1、以下图片的补偿调节的可以么？
2、为何Negative control 也就是0浓度组，也有大量绿色荧光？
3、可以直接用P2、P3门的百分比代表红绿色荧光的变化么？还是必须要画十字门？

niwanmao

可以稍微减小一点，使P3里面都能包括里面的JC-1降低的细胞。
Negative组为什么有大量的JC-1降低的细胞，而CCCP反而低，这得找原因，是否两个样本上样的时候上反了？
可以直接用P3的比例反映结果。

Bojack

niwanmao 发表于 2018-12-23 13:23
可以稍微减小一点，使P3里面都能包括里面的JC-1降低的细胞。
Negative组为什么有大量的JC-1降低的细胞，而C ...

感谢老师。还有几个问题
1、 有的文献是采用荧光强度的数值，我才用P3门的百分比也是可以？
2、我的CCCP和negative组上样没弄反，是否可以直接采用0.3、0.6、1.2的图片？

niwanmao

Bojack 发表于 2018-12-23 18:25
感谢老师。还有几个问题
1、 有的文献是采用荧光强度的数值，我才用P3门的百分比也是可以？
2、我的CCCP ...

比值，是旧思维造成的，流式上，都应该讲分群和比例。

如果阴性组和CCCP组没上反，那么这个结果就诡异了，无法解释了。

Bojack

niwanmao 发表于 2018-12-24 20:00
比值，是旧思维造成的，流式上，都应该讲分群和比例。

如果阴性组和CCCP组没上反，那么这个结果就诡异了 ...

我的步骤是，胰酶消化贴壁细胞后 再放入EP管好加Jc-1在温箱孵育。胰酶是否会影响线粒体的膜电位呢？Abcam网站有推荐使用0.5mM的EDTA消化细胞。
而且我的1.2浓度降低的反而更小。

niwanmao

Bojack 发表于 2018-12-24 21:53
我的步骤是，胰酶消化贴壁细胞后 再放入EP管好加Jc-1在温箱孵育。胰酶是否会影响线粒体的膜电位呢？Abcam ...

为什么这样，我觉得还是得你平时重复几次找找原因，至少这样的结果是没法发表的，阳性对照CCCP反而这么低，无论如何Reviewer都是不认同的。

Bojack

niwanmao 发表于 2018-12-25 07:54
为什么这样，我觉得还是得你平时重复几次找找原因，至少这样的结果是没法发表的，阳性对照CCCP反而这么低 ...

老师，我又重复了一次。对于结果有一些困惑，您看下结果。
问题：1，为何CCCP组出现两个细胞群？两个细胞群中的有膜电位降低的么？
2，各组的十字门中Q2-4象限的细胞是不是属于膜电位降低的？

niwanmao

Bojack 发表于 2019-1-3 11:00
老师，我又重复了一次。对于结果有一些困惑，您看下结果。
问题：1，为何CCCP组出现两个细胞群？两个细胞 ...

应该将PE-FITC的补偿调大，使FITC强的那群向下去，圈FITC略强的这群。但是你的实验结果非常怪异，反而0孔非常高，所以我怀疑要么P1门的位置不对，要么就是出了其它什么问题。