调补偿时，如果有阳性群有两个，应该选择哪一群调节补...

immunology

在做流式的时候，有的marker对应的阳性群明显的有两群，那么在选择marker的过程中，应该选择哪一群作为阳性群呢？有没有什么讲究。
例如CD44 marker，有明显的阴阳两群细胞，在flowjo或者diva软件上，从histogram图上的线性门 选择阳性细胞时，是把所有的阳性细胞都圈上，还是只圈某一群？
如下图所示。

immunology

假如选择高阳性群作为标准，那么对于低阳性群肯定就是补偿过当的，如果选择低阳性群，补偿对于高阳性群肯定就是补偿不足，就算选择中间的话，对于两边的细胞均不是恰当补偿，那么应该怎么办呢？

robert1988

选高的就行，这个主要是看两个通道之间的overlap， 求一个百分比， 所以如果这两个都是真实信号的话，理论上对其他通道的overlap都一样，选高的可以让误差小一点。但如果有一个是自发荧光之类的假信号，那就不一样了，需要谨慎排除。

niwanmao

immunology 发表于 2019-3-15 21:39
假如选择高阳性群作为标准，那么对于低阳性群肯定就是补偿过当的，如果选择低阳性群，补偿对于高阳性群肯定 ...

如果确实存在像你说的这种情况，那么说明这里面肯定有非荧光渗漏因素在里面，例如@robert1988 所说的一些非特异性荧光，我们平时临床免疫分型也碰到过类似情况，由一些死细胞引起。
所以要找最高、且特异性高的阳性群调节补偿。

liuruiluna

嗯 要结合FSC/SSC 的门看看啥样，尽量看点图来调补偿， 峰图不清楚的，而且也不准确