流式结果分析 谢谢

qinyalu115

我的流式结果 第二象限的细胞 感觉不是一群 类似该怎么改进一下火箭不知道

niwanmao

一般来说，位于对角线的火箭状都提示细胞状态差，或细胞碎片，或非特异性染色，需要注意染色时的操作手法轻柔和或避免使用损伤细胞的方法，不过不可能完全避免。象你这种第二象限的细胞比例不高，其实问题不大，我认为不需要改进。

shaoyang

大哥，我这情况呢，是CFSE浓度过头了吗？理想中的结果应该是CFSE+PI+和CFSE+PI-各有一群啊，纠结
小弟是新手，接触流式不过一个月。求帮助！

niwanmao

大哥，我这情况呢，是CFSE浓度过头了吗？理想中的结果应该是CFSE+PI+和CFSE+PI-各有一群啊，纠结
小弟是新 ...
shaoyang 发表于 2010-11-26 17:55

                               
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你的补偿调节应该是到位的，CSFE单阳性细胞群的中心位置与阴性细胞的中心位置在一个水平线上。至于阳性细胞群的拖尾，可能与部分细胞的非特异性染色有关。我奇怪的是，为什么你的PI阳性的细胞一点都没有呢？是不是破膜方面有问题？（PS：拖尾往上翘的这部分不算真正的PI阳性）

qinyalu115

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谢谢倪老师  
我测的是细胞内抗原 透膜后细胞会损失 ， 再加上洗涤次数过多 ，   还是间接标记 所以很麻烦  可是这样的结果让我很灰心 啊

qinyalu115

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过多或无必要的离心。尽可能使用低速离心  到底多少合适？如果是细胞内抗原 离心该用多少？
可在缓冲液中加入BSA (0.1 - 1%)
使用低浓度的BSA 可提高标本质量，降低自发荧光和增加细胞群分辨率 为什么 谢谢


   

niwanmao

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过多或无必要的离心。尽可能使用低速离心  到底多少合适？如果是细胞内抗原 离心该用多少？
可在缓冲 ...
qinyalu115 发表于 2010-11-27 01:25

                               
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1、离心速度我们一般都是用1300-1500转/分。
2、bsa是可以减少一些非特异性染色，可以试试。
不过，我觉得你这样的结果还可以接受吧。

niwanmao

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谢谢倪老师  
我测的是细胞内抗原 透膜后细胞会损失 ， 再加上洗涤次数过多 ，   还是间接标记 所以 ...
qinyalu115 发表于 2010-11-26 21:56

                               
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胞内抗原用间标不太合适，影响因素太多。

shaoyang

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谢谢您的指导，我回头再摸摸PI染色条件看看，出了好结果再来发图，谢谢！


   

兔子赵

请教，倪老师你说的低浓度的BSA，大概是什么浓度？