大家帮我分析一下

gdmcwjx2000

本人是在检测人血TH17的表达，使用的是三色抗体：CD4 PE-Cy5、IL-23 p40/p70 PE、IL-17A FITC。但结果总是这样：CD4+IL17+很低，反而CD4-IL17+的比例还高。不知道是什么问题，希望大家指点。
wjx-1劳来珠.pdf (96 KB, 下载次数: 20)

2010-12-20 21:39 上传

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wjx-梁荣华.pdf (94.07 KB, 下载次数: 11)

2010-12-20 21:40 上传

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wjx-3陈胜祥.pdf (94.8 KB, 下载次数: 10)

2010-12-20 21:43 上传

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niwanmao

从这几个图来看，看你的IL-17 表达很弱，不一定是真阳性，这里要问一句的是：你们是提取PBMC的吧，PBMC除了淋巴细胞，还可能包含单核细胞，所以我的感觉就是你圈的那部分粉红色的细胞很可能就是单核细胞，比如wjx-杨火荣这个文件中，粉红色这堆细胞就很少。粉红色这堆细胞跟绿色的细胞分的很开，而且CD4还是全阴性的。

gdmcwjx2000

是的，我是先提取外周单个核细胞，然后经过刺激，温箱培养后加破膜固定加抗体，最后检测。请问，应该如何改进呢？谢谢！

niwanmao

是的，我是先提取外周单个核细胞，然后经过刺激，温箱培养后加破膜固定加抗体，最后检测。请问，应该如何改 ...
gdmcwjx2000 发表于 2010-12-21 23:01

                               
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我建议你在方法学上可以参考一下这篇文章：http://www.sciencedirect.com/sci ... a0&searchtype=a

bravegao

你是先用免疫磁珠把CD4+细胞筛选出来的吗？刺激剂为何种？我做th17，但用CD3+CD8-加淋巴双Region圈出CD4+细胞，因为大部分刺激剂都使CD4抗原决定簇消失，结果严重不准。

gdmcwjx2000

我用的刺激剂等是佛波醇酯+离子霉素+莫能霉素，能否给个qq,详细请教！谢谢