细胞凋亡的分析

乖乖的萱仔 · 发表于 2019-7-8 17:19:20

各位老师，日前做了细胞凋亡实验共3组各3复孔（2个处理组+1对照组），流式图出来和之前不一样，细胞普遍都集中在双阳区（Q2），请看下作图处理是否有问题FSC-A，FSC-H去黏连是否正确？此外对于同组复孔，有的Q2群特别宽，请问是什么原因?

niwanmao · 发表于 2019-7-8 21:22:44

你这里要关注的不是粘连问题，而是为什么Annexin V和PI双阳这么高

乖乖的萱仔 · 发表于 2019-7-9 08:38:41

niwanmao 发表于 2019-7-8 21:22
你这里要关注的不是粘连问题，而是为什么Annexin V和PI双阳这么高

我也很奇怪，请问倪老师，一般情况下双阳性这么高会什么原因？有哪些情况会造成假阳性？

tiger · 发表于 2019-7-9 09:08:54

乖乖的萱仔发表于 2019-7-9 08:38
我也很奇怪，请问倪老师，一般情况下双阳性这么高会什么原因？有哪些情况会造成假阳性？ ...

请把你样品制备过程说一下，尤其是染色前的过程。

乖乖的萱仔 · 发表于 2019-7-9 10:07:20

tiger 发表于 2019-7-9 09:08
请把你样品制备过程说一下，尤其是染色前的过程。

培养基各自吸到管子里，pbs洗，洗后的废液收集到同一管子里，消化，终止消化，再次收集到同一管子里，800r，5分钟离心，弃掉上清，加200u 1x 缓冲液，上机前15分钟加了染料

niwanmao · 发表于 2019-7-9 11:00:12

乖乖的萱仔发表于 2019-7-9 10:07
培养基各自吸到管子里，pbs洗，洗后的废液收集到同一管子里，消化，终止消化，再次收集到同一管子里，800 ...

消化是问题关键，贴壁细胞不是非常适合做Annexin V/PI，特别容易产生假阳性。

乖乖的萱仔 · 发表于 2019-7-9 11:31:55

niwanmao 发表于 2019-7-9 11:00
消化是问题关键，贴壁细胞不是非常适合做Annexin V/PI，特别容易产生假阳性。 ...

1.请问贴壁细胞一般用什么办法测凋亡比较好？
2.Annexin法是不是只适合分析早期凋亡的精确性高一点，如果早期+晚期是不是会增大误差，因为双阳区会存在死细胞？

tiger · 发表于 2019-7-9 12:45:34

乖乖的萱仔发表于 2019-7-9 11:31
1.请问贴壁细胞一般用什么办法测凋亡比较好？
2.Annexin法是不是只适合分析早期凋亡的精确性高一点，如果 ...

细胞处理上没什么问题，你再仔细观察一下，细胞是不是长过了。所以阴性对照组也有大量的坏死细胞

账号		自动登录	找回密码
密码			加入流式中文网

[标本处理] 细胞凋亡的分析