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[标本处理] CD163染色

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发表于 2019-8-19 16:44:49 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星已解决
各位老师,我们最近在染巨噬细胞的Marker CD163,用的材料是THP-1(用IFN-γ/LPS,IL-4/IL-13刺激48h-72h)以及PBMC来源的CD14+细胞经GM-CSF诱导6天,但是FMO的图和CD163抗体染色的图都呈阴性,没有区别,有没有哪位老师做过这方面的染色,提供点帮助,万分感谢!我们用的CD163抗体是BD的,克隆号GHI/61,PE标记的。

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你是对的,虽然这个分子是胞膜的,但还是需要破膜染,因为我在文献《The macrophage scavenger receptor CD163.》里面找到了原因: CD163 is like most members of the SRCR family, expressed as a membrane bound protein, but until now is the only scavenger receptor that has been reported to be actively shed from the cell surface.
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发表于 2019-8-19 16:44:50 | 显示全部楼层
melodysz 发表于 2019-8-24 09:48
我们染膜没然出来,然后看见人家做细胞免疫染色,在胞内也有,又尝试破膜染,结果染出信号来了。。。听您 ...

你是对的,虽然这个分子是胞膜的,但还是需要破膜染,因为我在文献《The macrophage scavenger receptor CD163.》里面找到了原因:
CD163 is like most members of the SRCR family, expressed as a membrane bound protein, but until now is the only scavenger receptor that has been reported to be actively shed from the cell surface.
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发表于 2019-8-19 22:55:09 | 显示全部楼层
这篇文献CDDO-Me Redirects Activation of Breast Tumor Associated Macrophages看过没有?

他们的结果比较好,里面的方法学可参考一下:
To generate human macrophages, CD14+monocytes were cultured in complete HEPES-buffered RPMI 1640 supplemented with 10% FBS and either 10 ng/ml GM-CSF or 50 ng/ml M-CSF for 7 days, as differentiation with these stimuli results in M1 or M2 macrophage polarization, respectively. Macrophage polarization was verified using flow cytometry to measure expression of cell surface markers CD206 (clone: 15–2), CD163 (clone: GHI/61), and HLA-DR (clone: L243) and by ELISA analysis of secreted cytokines post-LPS stimulation.
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 楼主| 发表于 2019-8-20 16:18:03 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-8-19 22:55
这篇文献CDDO-Me Redirects Activation of Breast Tumor Associated Macrophages看过没有?

他们的结果比 ...

看了一下,我们用的培养条件是差不多的,测的Marker也差不多,之前我们染CD163是染膜蛋白,没有破膜染,是不是要破膜染色才能染出CD163?
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发表于 2019-8-21 09:02:25 | 显示全部楼层
melodysz 发表于 2019-8-20 16:18
看了一下,我们用的培养条件是差不多的,测的Marker也差不多,之前我们染CD163是染膜蛋白,没有破膜染, ...

CD163是清道夫受体,表达在表面,没在胞内。
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 楼主| 发表于 2019-8-24 09:48:55 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-8-21 09:02
CD163是清道夫受体,表达在表面,没在胞内。

我们染膜没然出来,然后看见人家做细胞免疫染色,在胞内也有,又尝试破膜染,结果染出信号来了。。。听您这么一说,我们后面可能再要尝试表面染色了。。。
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 楼主| 发表于 2019-8-26 09:34:16 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-8-21 09:02
CD163是清道夫受体,表达在表面,没在胞内。

非常感谢倪老师,帮了大忙了
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发表于 2021-10-25 17:09:49 | 显示全部楼层
melodysz 发表于 2019-8-24 09:48
我们染膜没然出来,然后看见人家做细胞免疫染色,在胞内也有,又尝试破膜染,结果染出信号来了。。。听您 ...

您好!
请问human PBMC是需要体外刺激之后才能表面染出CD163吗?naive状态的破膜染CD163也是可以染到跨膜或者胞内的那一段是吧?
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发表于 2021-10-27 03:46:35 来自手机 | 显示全部楼层
melodysz 发表于 2019-8-26 09:34
非常感谢倪老师,帮了大忙了

您好,请问最后染出来了吗?是按照倪老师上面参考文献的方法吗?
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发表于 2022-3-4 09:57:05 | 显示全部楼层
melodysz 发表于 2019-8-24 09:48
我们染膜没然出来,然后看见人家做细胞免疫染色,在胞内也有,又尝试破膜染,结果染出信号来了。。。听您 ...

您好!
请问human PBMC是需要体外刺激之后才能表面染出CD163吗?naive状态的破膜染CD163也是可以染到跨膜或者胞内的那一段是吧
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