AV/PI双染 空白组早调严重，望告知原因

daimaozideyu

细胞处理步骤：
（1）贴壁细胞HT-22用不含EDTA的胰酶消化后，4℃离心1000r/min，5min
（2）用遇冷的PBS洗涤细胞两次，每次4℃离心1000r/min，5min
（3）倒掉PBS，加入100ul 1*Binding Buffer 重悬细胞，放冰上到流式分析仪所在地方，车程不到十五分钟
（4）加入5ul Annexin-FITC 和5ul Annexin-PI，混匀，室温避光10min
（5）加入400ul 1*Binding Buffer ,混匀，上机检测。
FITC单染时不知为啥会出现右上角，导补偿调节过大，其次，空白组双染为什么会出现这么严重的早调，望各位告知。
                   

niwanmao

从PI 单染看，细胞状态还是可以的。
至于Annexin V不分群，我的建议先从第二步把洗涤的PBS改为Binding Buffer再试试。目前初步考虑缓冲液作用不足，如果还是不行就得怀疑Annexin V抗体了。

daimaozideyu

你好，老师，我的这个不是消化过度引起的假阳性吧？我用肺癌细胞试了，FITC单染很正常。另外，PBS需要含钙离子么？培养基含不含血清对结果有影响么？谢谢！

stef1981

细胞自身带有绿色荧光，不是早凋