胞内分子染色（固定破膜）对细胞比例影响

lxk47640

我的实验是检测三个单核细胞亚群（CD14+CD16-,CD16+CD14+,CD16+CD14dim）的比例及各亚群某胞内分子的表达水平差异。但是现在发现，经过固定破膜后，细胞亚群的比例发生了明显改变，
因此无法判断某胞内分子的来源亚群是否准确。

圈门策略参考文献：去粘连和活细胞后，SSC/CD45圈取单核细胞，圈取CD16+和CD14+细胞，再圈取HLA-DR+细胞，最后根据CD14,CD16进行亚群区分。前四张图是未经过固定破膜的表面染色的细胞群比例，后四张图是固定破膜后的比例。大概步骤如下：经过培养的PBMC吹吸混匀后一分为二，一份进行表面CD marker染色（4度 30分钟 避光），一份进行固定破膜，采用BD fixation/permeabilization试剂盒，胞内分子一抗4过夜后染二抗-Fitc洗涤上机。

lxk47640

这是什么原因造成的，怎么改进？

niwanmao

lxk47640 发表于 2019-12-2 09:21
这是什么原因造成的，怎么改进？

固定之后，FSC/SSC发生改变，导致单核群体圈的时候会略有不同。这个变异是正常的。